稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的計算公式為每克樣品中的菌株數(shù)=（C÷V)×M，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用稀釋液的體積，M代表稀釋倍數(shù)。學(xué)生對該公式的理解存在多種認知誤區(qū)，導(dǎo)致此類問題得分率低，現(xiàn)結(jié)合典型試題進行分析。

公式中的C不一定是所有實驗所得菌落數(shù)的平均值。為增強實驗說服力和減小實驗誤差，本實驗應(yīng)設(shè)置對照實驗和重復(fù)實驗。此實驗的對照實驗是將未涂布菌液的培養(yǎng)基放置在相同條件下培養(yǎng)，其目的是排除培養(yǎng)基污染對實驗結(jié)果產(chǎn)生的影響。若空白對照組平板出現(xiàn)菌落,則說明空白對照組的平板被污染，進而推測實驗組平板也可能被污染，這種情況不能直接將實驗組平板的菌落數(shù)取平均值，應(yīng)重新進行實驗，只有空白培養(yǎng)基沒有出現(xiàn)菌落，實驗結(jié)果才可信。此實驗的重復(fù)實驗是將同一稀釋度的稀釋液至少涂布3個平板（一般設(shè)置3—5個平板）。選擇菌落數(shù)在30—300的平板計算平均菌落數(shù)。若重復(fù)實驗中某個平板的菌落數(shù)與其他差別甚遠，如四個平板的菌落數(shù)分別為42、200、256、234，菌落數(shù)42與其他數(shù)值差異過大，說明該平板操作過程有誤，則該菌落數(shù)應(yīng)舍棄。若舍棄后不足三個平板，不能用菌落數(shù)相近的兩個平板取平均值，應(yīng)找到原因并重做實驗。若計算每克樣品中的某種菌株數(shù)，則C應(yīng)代表某一稀釋度下平板上生長的符合該菌菌落特征的菌落數(shù)的平均值，培養(yǎng)基上其他菌種形成的菌落數(shù)不能一并計算在內(nèi)。如檢測1L待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目只統(tǒng)計大腸桿菌菌落數(shù)的平均值。

平板中菌落數(shù)過少會導(dǎo)致計數(shù)誤差過大，菌落數(shù)過多又會造成計數(shù)困難，為確保有效活菌數(shù)的準確測定，應(yīng)合理設(shè)定稀釋倍數(shù)。待測樣品中微生物數(shù)量越多，所需稀釋倍數(shù)越大，而微生物數(shù)量越少，所需稀釋倍數(shù)越小。如測定土壤中細菌數(shù)量，一般選用104、105和106倍稀釋：測定放線菌數(shù)量，一般選用103、104和105倍稀釋；測定真菌數(shù)量，一般選用102、103和104倍稀釋：測定自來水中大腸桿菌數(shù)量，一般不稀釋，直接進行涂布培養(yǎng)。人教版高中生物教材給出的樣品稀釋的流程示范是將10g土樣加入到90mL無菌水中得到稀釋10倍的樣液，從稀釋10倍的樣液中取1mL加入到9mL無菌水中得到稀釋100倍的樣液，依次類推。若取6g土樣配制成稀釋10倍的土壤溶液，則土壤占混合液的10%，土壤溶液總量為60mL，應(yīng)添加54mL的無菌水。若取1g土樣配制成稀釋100倍的土壤溶液，則土壤占混合液的1%，土壤溶液總量100mL，應(yīng)添加99mL的無菌水。

微生物計算公式中的V代表涂布平板時所用稀釋液的體積.通常為0.1mL。但若待測樣品中微生物數(shù)目較少，接種0.1mL經(jīng)培養(yǎng)后平板上菌落數(shù)達不到30�？稍龃蠼臃N量（如接種1mL）。試題中經(jīng)常改變涂布平板時所用的稀釋液和所求樣品的體積和質(zhì)量，要注意做好單位換算，如1cm3=103μL=1 mL=10L。體積和質(zhì)量的換算公式是體積=質(zhì)量：密度（V=m/p），水的密度是1g/cm3.則質(zhì)量頭1 g的水的體積是1 cm3即1 mL。

從稀釋涂布平板計數(shù)的原理分析，運用該方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。因為樣品一般不易完全分散成單個細胞，當(dāng)兩個或多個活細胞連在一起時。平板上觀察到的只是一個菌落，從稀釋涂布平板計數(shù)的過程分析 稀釋倍數(shù)是否合適、涂布是否均勻、培養(yǎng)環(huán)境是否能保證微生物正常生長、計數(shù)是否存在漏計或重復(fù)計數(shù)等情況都會影響統(tǒng)計結(jié)果。除此之外，還要考慮培養(yǎng)時間對菌落數(shù)目的影響。菌落數(shù)目需要每隔一段時間統(tǒng)計一次，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時間不足遺漏菌落的數(shù)目。