熱酚提取法的原理是將細菌懸液加于熱酸——水混合液中，冷卻，離心混合液可分為水溶液層，內(nèi)含水溶性脂多糖及核酸等及酸層、內(nèi)含蛋白質(zhì)。近年來發(fā)現(xiàn)在酸層中也含糖類。經(jīng)離心后沉淀含細胞殘體。

主要設(shè)備

高速離心機，水浴鍋，冰箱，試管，超聲儀，透析袋等。

實驗步驟

1. 熱酚提取法： 

   1) 細菌濃懸液用鹽水經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分，20分鐘離心洗滌一次。

   2) 將沉淀的菌混勻于蒸餾水中，放66℃水浴，然后滴加等量的90%熱酚溶液(預熱至66℃)，邊加邊搖，而后在66℃水浴中攪拌25分鐘。 

   3) 在水浴中冷卻，于4℃冰箱過夜。 

   4) 以2000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘。 

   5) 將上層水溶液吸到另一試管中。 

   6) 剩下的酚層及殘渣組分可再加上述同量水在熱水浴中攪拌30分鐘，冷卻，離心，取上層水溶液。將兩次提的水溶液混合，置透析袋中于生理鹽水中透析2天，其間換幾次鹽水，以除去酚。 

   7) 透析后的水溶液層經(jīng)濃縮(如用聚乙二醇在透析袋外層涂抹以除去水分)。即成粗制脂多糖，于冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?nbsp;

2. 超聲波處理法 

   1) 獲得的菌液經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分，20分鐘離心洗滌1—2次，將沉淀配成2倍于濕菌濃度的濃菌液。 

   2) 用超聲波發(fā)生器中頻(約相當于12000cps)處理20分鐘。

   3) 處理液經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分，離心30分鐘，吸取上清液即為脂多糖抗原。置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?nbsp;

3. 煮沸法

將培養(yǎng)后得到的濃菌液沸水浴煮沸2小時。置冰箱靜置兩星期以上(使菌體殘渣自由下沉)。3000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清夜即為粗脂多糖抗原，置冰箱中保存?zhèn)溆谩?/div>