操作步驟

可能原因

解決辦法

選擇試劑

選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

加   樣

1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長特別是室內溫度較高時；
3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

1.標本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2.加樣后及時放入孵箱。
3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5.標本較多時，請分批操作。

孵   育

1.孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；
2.孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。

1.貼封片或加蓋；
2.按說明步驟嚴格控制操作時間。

洗   板

1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。
3.反應板過多造成洗板等待時間長。

1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2.合理安排，或多用幾臺洗板機。

顯   色

1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2. 加樣時保持顯色劑不外流；
3.A、B液應避免接觸金屬器械。

終   止

加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。

加終止液時應避免產生氣泡。

讀   板

讀板時板底不清潔。

應保證酶標板清潔。

全過程

1.整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;
2.實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。