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動物細胞的幾種轉(zhuǎn)染方法對比

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-08-29  來源:實驗室資訊網(wǎng)
核心提示: 脂質(zhì)體法采用陽離子脂質(zhì)轉(zhuǎn)染體,具有較高的轉(zhuǎn)染效率,不但可以轉(zhuǎn)染其他化學方法不易轉(zhuǎn)染的細胞系,而且還能轉(zhuǎn)染從寡核苷酸到人
      脂質(zhì)體法采用陽離子脂質(zhì)轉(zhuǎn)染體,具有較高的轉(zhuǎn)染效率,不但可以轉(zhuǎn)染其他化學方法不易轉(zhuǎn)染的細胞系,而且還能轉(zhuǎn)染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質(zhì).此外,脂質(zhì)體體外轉(zhuǎn)染同時適用于瞬時表達和穩(wěn)定表達,與以往不同的是脂質(zhì)體還可以介導DNA和RNA轉(zhuǎn)入動物和人的體內(nèi)用于基因治療。人工合成的陽離子脂質(zhì)體和帶負電荷的核酸結(jié)合后形成復合物,當復合物接近細胞膜時被內(nèi)吞成為內(nèi)體進入細胞質(zhì),隨后DNA復合物被釋放進入細胞核內(nèi).利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法最重要的就是防止其毒性,因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題.
 
 
 
電穿孔法常用來轉(zhuǎn)染如植物原生質(zhì)體這樣的常規(guī)方法不容易轉(zhuǎn)染的細胞。電穿孔靠脈沖電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內(nèi)。導入的效率與脈沖的強度和持續(xù)時間有關(guān)系,基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導入細胞內(nèi),這種方法適用于培養(yǎng)的細胞核在體的細胞.
 
 
DEAE葡聚糖是最早應用哺乳動物細胞(小鼠細胞、大鼠細胞各類傳代細胞等)轉(zhuǎn)染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結(jié)合后接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染成功地用用于瞬時表達的研究,但用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染卻不是十分可靠。
 
 
磷酸鈣共沉淀法因為試劑易取得、價格便宜而被廣泛用于瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的研究,先將DNA和CaCl2混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉淀,最后把含有沉淀的混懸液加到培養(yǎng)的細胞上,通過細胞胞膜的內(nèi)吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內(nèi)的核酸酶活性而保護外源DNA免受降解.
 
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磷酸鈣法  穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)   不適用于原代細胞,操作簡便但重復性差,有些細胞不適用;
 
陽離子脂質(zhì)體法  穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)所有細胞   適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大;
 
電穿孔法   穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)所有細胞    適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大;
 
DEAE-右旋糖苷法   瞬轉(zhuǎn)  相對簡便、結(jié)果可重復,但對細胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時需除血清;
 
病毒介導法    穩(wěn)轉(zhuǎn)   可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞,體內(nèi)細胞等;
 
腺病毒  瞬時轉(zhuǎn)染特定宿主     可用于難轉(zhuǎn)染的細胞需考慮安全因素;
 
Biolistic顆粒傳遞法瞬轉(zhuǎn)  可用于人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系以及原代細胞;
 
顯微注射法  穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)   轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞。
編輯:songjiajie2010

 
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