高分子磁性微球技術(shù)屬于磁性分離技術(shù),是將分離技術(shù)的高選擇性、高回收率的特點(diǎn)與磁性材料的磁可導(dǎo)性相結(jié)合的一種新的分離技術(shù),特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、快速,分離效果好,在細(xì)胞分離、分類,蛋白質(zhì)提純,核酸分離等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。
一. 細(xì)胞分離
高分子磁性微球作為不溶性載體,可在其表面接枝具有生物活性的吸附劑或其它配體等活性物質(zhì),利用它們與特定細(xì)胞的特異性結(jié)合,在外加磁場(chǎng)的作用下可將細(xì)胞分離、分類?捎糜诩(xì)胞的分類以及對(duì)其種類數(shù)量進(jìn)行研究。
在細(xì)胞分離中,高分子磁性微球通過(guò)免疫邏輯反應(yīng)或非免疫邏輯反應(yīng),可用來(lái)分離不需要的細(xì)胞(消極選擇),或富集所需的細(xì)胞(積極選擇)。這個(gè)理論可用來(lái)從骨髓中移走癌細(xì)胞(骨髓的純化),通過(guò)對(duì)組織培養(yǎng)液的積極或消極選擇,純化細(xì)胞群,從而進(jìn)行各種細(xì)胞免疫分析等。
磁性微球分離法與常用的細(xì)胞分離方法相比,要更加簡(jiǎn)便、快速、高效,在這一領(lǐng)域已顯示出引人注目的應(yīng)用前景。
二. 蛋白質(zhì)提純
蛋白質(zhì)的磁分離是通過(guò)對(duì)磁性微球表面進(jìn)行改性,共價(jià)結(jié)合能被目標(biāo)蛋白質(zhì)識(shí)別和可逆結(jié)合的配基,然后對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。
在磁分離過(guò)程中,將磁性微球直接放入含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的混合溶液中,目標(biāo)蛋白質(zhì)與磁性微球緊密結(jié)合,
然后利用外部磁場(chǎng)進(jìn)行分離。
以磁性微球?yàn)楣滔嘟橘|(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行提純是一種新興的蛋白分離技術(shù)。與傳統(tǒng)分離方法相比,蛋白質(zhì)的磁分離技術(shù)具有快速、高純、高收率等優(yōu)點(diǎn)。
三. 核酸分離
高分子磁性微球可用于分子生物學(xué)領(lǐng)域,進(jìn)行DNA和RNA的分離、純化。傳統(tǒng)的核酸分離技術(shù)存在的缺點(diǎn)是耗時(shí)多, 難以自動(dòng)化,不能用于分析小體積樣品, 分離不完全, 而使用高分子磁性微球進(jìn)行核酸分離則可以避免這些局限。
高分子磁性微球分離核酸,是基于堿基配對(duì)原則,通過(guò)偶合與目標(biāo)核酸堿基互補(bǔ)的一段引物鏈而達(dá)到分離目標(biāo)核酸的目的。
與傳統(tǒng)的核酸分離技術(shù)相比,這種分離方法更加簡(jiǎn)單、快速、選擇性高。例如偶合有寡聚糖(Oligo(Dt)25)的磁性微球可以快速、高效地對(duì)mRNA進(jìn)行純化。純化后的mRNA可以直接用來(lái)建立cDNA文庫(kù)和RT-PCR擴(kuò)增。提取鍵合在蛋白質(zhì)上的特種DNA通常困難而費(fèi)時(shí),如果使用DNA親和磁性微球,則可顯著縮短提取時(shí)間。DNA通過(guò)一個(gè)鏈霉素抗生蛋白生物素鍵連接到磁性微球上,在外加磁場(chǎng)的作用下,帶有特種DNA的磁性微球可以迅速分離,經(jīng)過(guò)洗滌后,可以得到高純度的DNA。
與磁性高分子微球結(jié)合的DNA在分子生物領(lǐng)域應(yīng)用很廣,例如DNA結(jié)合在磁性微球上,可用來(lái)提純結(jié)合在蛋白質(zhì)上的DNA;采用雜交技術(shù)還可對(duì)mRNA進(jìn)行純化和探測(cè)等。
一. 細(xì)胞分離
高分子磁性微球作為不溶性載體,可在其表面接枝具有生物活性的吸附劑或其它配體等活性物質(zhì),利用它們與特定細(xì)胞的特異性結(jié)合,在外加磁場(chǎng)的作用下可將細(xì)胞分離、分類?捎糜诩(xì)胞的分類以及對(duì)其種類數(shù)量進(jìn)行研究。
在細(xì)胞分離中,高分子磁性微球通過(guò)免疫邏輯反應(yīng)或非免疫邏輯反應(yīng),可用來(lái)分離不需要的細(xì)胞(消極選擇),或富集所需的細(xì)胞(積極選擇)。這個(gè)理論可用來(lái)從骨髓中移走癌細(xì)胞(骨髓的純化),通過(guò)對(duì)組織培養(yǎng)液的積極或消極選擇,純化細(xì)胞群,從而進(jìn)行各種細(xì)胞免疫分析等。
磁性微球分離法與常用的細(xì)胞分離方法相比,要更加簡(jiǎn)便、快速、高效,在這一領(lǐng)域已顯示出引人注目的應(yīng)用前景。
二. 蛋白質(zhì)提純
蛋白質(zhì)的磁分離是通過(guò)對(duì)磁性微球表面進(jìn)行改性,共價(jià)結(jié)合能被目標(biāo)蛋白質(zhì)識(shí)別和可逆結(jié)合的配基,然后對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。
在磁分離過(guò)程中,將磁性微球直接放入含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的混合溶液中,目標(biāo)蛋白質(zhì)與磁性微球緊密結(jié)合,
然后利用外部磁場(chǎng)進(jìn)行分離。
以磁性微球?yàn)楣滔嘟橘|(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行提純是一種新興的蛋白分離技術(shù)。與傳統(tǒng)分離方法相比,蛋白質(zhì)的磁分離技術(shù)具有快速、高純、高收率等優(yōu)點(diǎn)。
三. 核酸分離
高分子磁性微球可用于分子生物學(xué)領(lǐng)域,進(jìn)行DNA和RNA的分離、純化。傳統(tǒng)的核酸分離技術(shù)存在的缺點(diǎn)是耗時(shí)多, 難以自動(dòng)化,不能用于分析小體積樣品, 分離不完全, 而使用高分子磁性微球進(jìn)行核酸分離則可以避免這些局限。
高分子磁性微球分離核酸,是基于堿基配對(duì)原則,通過(guò)偶合與目標(biāo)核酸堿基互補(bǔ)的一段引物鏈而達(dá)到分離目標(biāo)核酸的目的。
與傳統(tǒng)的核酸分離技術(shù)相比,這種分離方法更加簡(jiǎn)單、快速、選擇性高。例如偶合有寡聚糖(Oligo(Dt)25)的磁性微球可以快速、高效地對(duì)mRNA進(jìn)行純化。純化后的mRNA可以直接用來(lái)建立cDNA文庫(kù)和RT-PCR擴(kuò)增。提取鍵合在蛋白質(zhì)上的特種DNA通常困難而費(fèi)時(shí),如果使用DNA親和磁性微球,則可顯著縮短提取時(shí)間。DNA通過(guò)一個(gè)鏈霉素抗生蛋白生物素鍵連接到磁性微球上,在外加磁場(chǎng)的作用下,帶有特種DNA的磁性微球可以迅速分離,經(jīng)過(guò)洗滌后,可以得到高純度的DNA。
與磁性高分子微球結(jié)合的DNA在分子生物領(lǐng)域應(yīng)用很廣,例如DNA結(jié)合在磁性微球上,可用來(lái)提純結(jié)合在蛋白質(zhì)上的DNA;采用雜交技術(shù)還可對(duì)mRNA進(jìn)行純化和探測(cè)等。