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【文章來源】藥物微生物檢驗(yàn)公眾號
藥品中的成分復(fù)雜，包括有效成分、輔料（淀粉、糊精、色素等），這些成分當(dāng)中的有機(jī)物很容易遭受微生物污染。在藥品生產(chǎn)過程中，微生物檢測是評價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的重要指標(biāo)之一。在微生物檢測的過程中，菌種保藏是一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)性工作。使用正確的方法對菌種進(jìn)行保藏可以有效地避免菌種的死亡、退化和污染，便于生產(chǎn)及科學(xué)研究。國家也頒布了相應(yīng)的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)。
一、菌種的復(fù)蘇
1.制備菌懸液母液：根據(jù)微生物的種類，向凍干菌種管中加入適量適合微生物生長的培養(yǎng)液（如表1.1[1] 注意是液體培養(yǎng)基），混合均勻。
表1.1 不同菌種適用的液體培養(yǎng)基
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菌株種類 |
培養(yǎng)液 |
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細(xì)菌 |
營養(yǎng)肉湯 |
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白色念珠菌 |
沙堡液體培養(yǎng)基 |
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分枝桿菌 |
蘇通綜合液體培養(yǎng)基 |
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黑曲霉菌 |
麥芽浸膏營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 |
2.將菌懸液按照合適的比例加入到含有培養(yǎng)液的試管中，根據(jù)微生物的種類確定培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間（表1.2）[1]，進(jìn)行菌種復(fù)蘇。培養(yǎng)后的微生物為第1代培養(yǎng)物。
表1.2 不同菌種的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間
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菌株種類 |
培養(yǎng)溫度 |
培養(yǎng)時(shí)間 |
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一般菌種 |
36 ℃±1 ℃ |
18 h～24 h |
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黑曲霉菌 |
30 ℃±1 ℃ |
42 h～48 h |
二、菌種傳代
1.根據(jù)菌株種類選擇合適的固體平皿培養(yǎng)板（如表2.1[1]注意是固體培養(yǎng)基），取第1代培養(yǎng)物進(jìn)行劃線接種，并在適宜溫度和培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。平皿上長出的菌落為第2代培養(yǎng)物。
表2.1 不同菌種適用的固體培養(yǎng)基
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菌株種類 |
培養(yǎng)液 |
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細(xì)菌 |
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 |
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白色念珠菌 |
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 |
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分枝桿菌 |
改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復(fù)合瓊脂培養(yǎng)基 |
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黑曲霉菌 |
麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基 |
2.在含有第2代培養(yǎng)物的平皿上挑取典型菌落，接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基平皿或斜面上，在適宜溫度和培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)（表2.2）[1]，記為第3代培養(yǎng)物。
表2.2 不同菌種的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間
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菌株種類 |
培養(yǎng)溫度 |
培養(yǎng)時(shí)間 |
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一般菌種 |
36 ℃±1 ℃ |
18 h～24 h |
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分枝桿菌 |
36 ℃± 1℃ |
72 h |
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黑曲霉菌 |
30 ℃±1 ℃ |
42 h～48 h |
3.按照上述方法將菌種培養(yǎng)至所需代數(shù)即可。
三、流程示意圖
四、操作要點(diǎn)
1.選擇合適的培養(yǎng)基很重要。
2.全程無菌操作，避免污染。
3.培養(yǎng)時(shí)間不要過長。
4.信息標(biāo)注很重要（菌種名稱、菌種號、代數(shù)、傳代日期等）。
五、參考文獻(xiàn)
[1]WST683-2020 消毒試驗(yàn)用微生物要求
具體的操作細(xì)節(jié)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)即可，小編就不贅述了。需要WS/T 683電子版的小伙伴記得關(guān)注公眾號后，加小編微信好友領(lǐng)取哦！
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