如何通過SDS-PAGE檢測小肽？

您的樣品是否含有<20 kDa的目標(biāo)蛋白質(zhì)？請下載如何使用SDS-PAGE檢測合成肽的方案，其中包括考馬斯藍(lán)染色，銀染和電印跡的有效方法。
Tricine-SDS-PAGE常用于分離1-100 kDa質(zhì)量范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)。它是用于分辨小于30kDa蛋白質(zhì)的首選電泳系統(tǒng)。
通過SDS-PAGE看到小肽確實(shí)是非常困難的。 Tris-tricine凝膠會(huì)給你更好的分辨率。如果您只想檢測肽，質(zhì)譜仍然是確認(rèn)肽身份的最佳方法。
     小肽與較大的蛋白質(zhì)結(jié)合較少的考馬斯亮藍(lán)色。因此，較小的肽通過考馬斯染色或銀染更難以檢測。如果你真的想在凝膠上看到你的肽，你可以嘗試加載更多的樣品。除非您認(rèn)為您的肽從凝膠中遷移出來，否則更換凝膠百分比不會(huì)有多大幫助。您可以增加常規(guī)17％凝膠中交聯(lián)劑的百分比。此外，與常規(guī)8.8相比，將分辨凝膠的pH值提高到9.5。另外，尿素（4-8M）的添加有助于削尖帶。
如果您要使用西方，這是一種更靈敏的檢測方法，請使用西方，而不是凝膠染色。然而，肽可以簡單地穿過膜。如果你重復(fù)實(shí)驗(yàn)，試著把兩片膜片和更短的時(shí)間轉(zhuǎn)移（在200毫安時(shí)少于1小時(shí)）。 0.2um的毛孔就足夠了。你可以得到更小的毛孔，但這不應(yīng)該是必要的。您可能需要按設(shè)備的建議電流密度（mA / cm2）進(jìn)行半干轉(zhuǎn)印15-20分鐘。短的15分鐘轉(zhuǎn)移時(shí)間適用于大多數(shù)小肽。
     如果您可以提前計(jì)劃并合成用生物素標(biāo)記的對照小肽，您可以監(jiān)測轉(zhuǎn)移過程及其與鏈霉親和素綴合的HRP結(jié)合膜的能力。