今年臺風(fēng)“蘇羅迪”后，福建長樂對蝦發(fā)光病嚴重，筆者針對發(fā)光死蝦主要采用了病原分離、人工感染等方法，對熒光菌感染途徑進行探究，并提出了初步的防治方法。

 

    對蝦發(fā)光病是一種在對蝦養(yǎng)殖中常見的細菌性疾病，它具有發(fā)病快、傳播廣、感染力強、致死率高、防治困難等特點，是對蝦養(yǎng)成期間危害較大的流行病之一。我國對蝦發(fā)光病主要發(fā)生于福建、廣東、廣西等沿海地區(qū)，主要危害凡納濱對蝦 (Penaeus vannamei) 和斑節(jié)對蝦 (Penaeus monodon)。目前的研究表明，引起對蝦發(fā)光病的病原有霍亂弧菌(V．cholerae) 、燦爛弧菌(V．splendidus) 、火神弧菌(V．logei) 、哈維氏弧菌(V．harveyi) 和費氏弧菌(V．fischeri) 5 種，但其主要病因是哈維氏弧菌感染。

 

    今年臺風(fēng)“蘇羅迪”后，福建長樂對蝦發(fā)光病嚴重，筆者針對發(fā)光死蝦主要采用了病原分離、人工感染等方法，對熒光菌感染途徑進行探究，并提出了初步的防治方法。

 

一、研究方法

 

1、細菌分離

 

    將采自福建長樂某養(yǎng)殖場已經(jīng)死亡的發(fā)光病蝦，體表用75%乙醇消毒后，用無菌解剖刀在超凈工作臺上切開病蝦腹肌肉，用TSA和TCBS固體培養(yǎng)基對肌肉進行細菌劃線分離，30℃培養(yǎng)24h后觀察菌落生長情況。

 

    挑取TSA和TCBS培養(yǎng)基上的典型菌落，再次劃線純化后分別接種于含2% NaCl的TSB中，30℃振蕩培養(yǎng)10h，OD560測定細菌濃度，然后分別拌料投喂，每克飼料含細菌數(shù)量為106cfu，每組40尾，對照組直接投喂，將南美白對蝦放在藍色玻璃桶（0.3m3）中飼養(yǎng)。

 

2、人工感染

 

    將取自長樂某養(yǎng)殖場的健康對蝦(體長6-8cm)飼養(yǎng)于藍色玻璃鋼桶（0.3m3），養(yǎng)殖用水為沙濾水，鹽度30‰，水溫22-24℃，暫養(yǎng)4d，每組30尾蝦。

 

    （1） 投喂感染：將試驗菌株的菌懸液（108cfu/mL）拌料制成試驗對蝦做餌料,濃度分別為102cfu/g、104cfu/g、106cfu/g，飼養(yǎng)、觀察5天，記錄對蝦死亡情況及發(fā)病癥狀，并及時移去死蝦。

 

    （2）創(chuàng)傷浸泡感染：將經(jīng)活化的新鮮試驗菌懸液 (108cfu/mL) 加入試驗用藍色玻璃鋼桶內(nèi)，充氣攪拌使海水分別為102cfu/mL、104cfu/mL、106cfu/mL，然后用針頭在健康試驗對蝦腹肌上刺扎，造成創(chuàng)傷后放入帶菌的海水中。

 

    （3）普通浸泡感染：方法同（2），不同的是不用將試驗蝦刺扎，直接將其放入帶菌海水中。

 

 

嚴重感染（感染后第2、3天）：游動緩慢、有明顯的胃炎、肝胰腺萎縮、體色明顯發(fā)紅

 

二、結(jié)果

 

1、分離與回歸感染

 

    從發(fā)病蝦苗體內(nèi)分離純化到3株優(yōu)勢菌A－1、A－2、A－3在TCBS培養(yǎng)基上顏色分別為綠色、 黃色、 黑色，在暗室只有A－1菌株發(fā)淡綠色熒光。經(jīng)回歸感染試驗證實，A－1能引起南美白對蝦死亡且死蝦發(fā)光，其癥狀與自然發(fā)病成蝦的癥狀相同，而其他優(yōu)勢菌均不能使死蝦發(fā)光，因此證實該菌為對蝦發(fā)光的致病菌之一。

 

2、人工感染

 

    （1）投喂感染：拌料投喂感染的實驗結(jié)果見表1。結(jié)果表明：對照組實驗期間沒有發(fā)生死亡；102cfu/g組在第3天對蝦開始死亡，實驗結(jié)束時，共死亡22尾，占73.3%；104cfu/g組在第2天開始死亡，實驗結(jié)束時，共死亡29尾，占96.7%；而106cfu/g在第2天出現(xiàn)死亡，在第4天已全部死亡。由此可見，飼料中熒光菌數(shù)量與對蝦死亡速度呈正相關(guān)。

    （2）創(chuàng)傷浸浴感染：創(chuàng)傷浸浴感染的實驗結(jié)果見表2。結(jié)果表明：對照組沒有發(fā)生死亡；102cfu/mL組在第4天開始死亡，實驗結(jié)束時，共死亡20尾，占66.7%；104cfu/mL在第3天開始死亡，實驗結(jié)束時，共死亡25尾，占83.3%；106cfu/mL組在第2天開始死亡，實驗結(jié)束時，全部死亡。由此可見，水體中的熒光菌數(shù)量與對蝦死亡速度呈正相關(guān)。

    （3）普通浸浴感染：普通浸浴感染的實驗結(jié)果見表3。結(jié)果表明：對照組、102cfu/mL組、104cfu/mL組均沒有發(fā)現(xiàn)死亡；106cfu/mL組在第4天開始死亡，實驗結(jié)束時，共死亡2條，占6.7%。由此可見，健康對蝦在含熒光菌的海水中不易被感染。

三、討論

 

    投喂感染的實驗結(jié)果表明，即使飼料中含有少量的發(fā)光細菌，仍然可以在較短的時間里，使對蝦大量死亡，這說明攝食感染是熒光菌感染健康對蝦最主要的感染方式。

 

    對蝦的捕捉搬運、受驚嚇以及頻繁活動，都有可能造成蝦體創(chuàng)傷，發(fā)光菌侵入蝦體后，利用機體組織作為營養(yǎng)物質(zhì)進行大量繁殖，并在熒光素酶的作用下使還原型熒光素氧化成氧化型熒光素，同時放出熒光，因而我們可見對蝦局部組織發(fā)白發(fā)光。大量繁殖的發(fā)光菌隨著蝦體的循環(huán)系統(tǒng)逐漸侵入到蝦體全身器官，遍布全身就使得蝦體全身死亡并發(fā)光。創(chuàng)傷感染的實驗結(jié)果表明，當(dāng)水體中的熒光菌含量在102cfu/mL，仍然會有超過60%的蝦發(fā)病死亡，這說明創(chuàng)傷感染也是熒光菌感染健康對蝦的一種重要途徑。

 

    本研究中普通浸浴感染的實驗結(jié)果表明，當(dāng)熒光菌濃度濃度達到106cfu/mL，會導(dǎo)致少量對蝦死亡，而當(dāng)濃度低于104cfu/mL時，不會引起對蝦死亡，在高位池中熒光菌數(shù)量一般不會超過102cfu/mL，所以說健康對蝦在含有熒光菌的蝦池較難感染發(fā)病，這說明普通浸浴感染不是引起對蝦發(fā)光的主要途徑。

 

    因此，防治南美白對蝦成蝦發(fā)光病需從切斷攝食感染和創(chuàng)傷浸浴感染途徑著手。

 

    在高位池中，可先進行消毒，后加芽孢桿菌、光合細菌，同時投喂優(yōu)質(zhì)飼料的方法來切斷這兩種主要的感染途徑。消毒的作用是殺死病蝦、弱蝦、蝦創(chuàng)傷部位的細菌和養(yǎng)殖環(huán)境中細菌，減少病原體的來源；消毒后及時撈起死蝦，避免攝食感染；加芽孢桿菌、光合細菌的作用是消毒導(dǎo)致養(yǎng)殖環(huán)境中細菌大量死亡，養(yǎng)殖水體的菌相處于“真空”狀態(tài)，添加有益細菌，能夠迅速占據(jù)有害細菌的生態(tài)位，使有害菌處于被抑制的狀態(tài)；投喂優(yōu)質(zhì)飼料的目的是提高養(yǎng)殖對蝦的健康程度，尤其是提高對蝦的免疫力，有效降低感染的概率。

 

作者：福建大北農(nóng)水產(chǎn)科技有限公司  黎東