1 材料和方法
1.1 供試材料
采用當家品種下寨65和青薯168.
1.2 試驗方法
1.2.1 催芽 于11月中旬左右,挑揀表皮光滑、正常薯形、大小均勻、無病害和無損傷薯塊,放置在有供暖的房間,室內(nèi)溫度24 ℃左右進行催芽。在催芽前薯塊正處于休眠期,采用0.05~0.l0 mg/L的GA3來處理薯塊,浸沒于GA3溶液中10~20 min,以打破休眠[4].
1.2.2 種薯處理 采用MS培養(yǎng)基,加入不同配比的激素,準備BA、NAA、GA3、IBA和IAA,由于激素在培養(yǎng)基中用量非常少,且不易溶于水,所以采用特殊的配置方法,配置成500 mg/L的溶液待用。當兩個品種的種薯芽長到2~3 cm時,挑選生長健壯的芽,用清水沖洗芽部表面污物,在無菌操作室采用12種不同的方法進行表面消毒,用最近制作的蒸餾水沖洗四五次,將表面消毒劑徹底清除,不同表面消毒劑處理時間見表1.
1.2.3 莖尖組織培養(yǎng) 在解剖鏡下剝?nèi)〈笮?.30~
0.50 mm莖尖生長點,置于不同濃度生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),培養(yǎng)基編號為MS1~MS12,另設(shè)不加任何生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基作為對照(CK),植物生長調(diào)節(jié)劑配比見表2.
1.2.4 馬鈴薯脫毒苗培養(yǎng) 在無菌條件下,將得到的無毒苗進行切段,每段帶一葉,置于不同種類、濃度的1/2MS培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),中國農(nóng)業(yè)網(wǎng)以不加任何生長調(diào)節(jié)劑的1/2MS培養(yǎng)基作為對照,編號為M1~M9,快繁培養(yǎng)基配比見表3.
2 結(jié)果與分析
2.1 不同表面消毒方法對莖尖成活率和污染的影響
從表4可以看出,在莖尖組織培養(yǎng)過程中,外植體在清水沖洗后,直接采用0.1 %升汞或5 %次氯酸鈉消毒,都可以將污染控制在5 %以下,但需時稍長,不同程度地影響到成活率。另外由于升汞的滲透性強,不宜徹底清洗,且對環(huán)境污染嚴重,建議盡量不要使用。
2.2 不同生長調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)基配比對莖尖組織生長的影響
從表5可以看出,不含生物調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基,馬鈴薯莖尖組織的生長非常緩慢,導(dǎo)致成苗率低下。在同等條件下,KT和6-BA對馬鈴薯莖尖組織的生長都具有促進作用,且效果顯著,就這兩種物質(zhì)而言,含有KT的培養(yǎng)基中成苗率較低。在同等條件下加入GA3,可明顯促進馬鈴薯莖尖組織分化,加快生長,提高成苗率。
2.3 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對馬鈴薯脫毒苗快繁的影響
經(jīng)過觀測表明,與對照培養(yǎng)基相比較,培養(yǎng)基中加入生長調(diào)節(jié)劑后,芽萌發(fā)推遲,有效促進幼根生長。生長調(diào)節(jié)劑濃度過大時,愈傷組織發(fā)達,生根受到抑制。在實驗中觀察到下寨65對NAA較為敏感,濃度稍大就會產(chǎn)生較大愈傷組織,生根較為緩慢,而青薯168反應(yīng)較為遲鈍,結(jié)果見表6.
3 結(jié)論
通過實驗發(fā)現(xiàn),在馬鈴薯脫毒技術(shù)實施過程中,采用酒精與其他兩種表面消毒劑配合使用效果最好,能有效控制污染,降低對莖尖組織的影響。剝離的莖尖組織誘導(dǎo)成苗是脫毒快繁的關(guān)鍵技術(shù),在實驗中,KT和BA均有助于莖尖組織分化成苗。在快繁中,適當濃度的生物調(diào)節(jié)劑對馬鈴薯莖段生根有促進作用,但當濃度過高時只產(chǎn)生分生組織,不利于小苗生根,而且各品種表現(xiàn)有所不同。