1.培養(yǎng)IL-2依賴細(xì)胞株CTLL-2細(xì)胞或HT-2細(xì)胞(檢測(cè)IL-2),或者IL-3依賴細(xì)胞株FDC-P1細(xì)胞或FL5.12細(xì)胞(檢測(cè)IL-3)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
2.取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔加0.1ml含1×104~2×104上述細(xì)胞之一的DMEM培養(yǎng)液(加10%小牛血清)。
3.每孔加0.1ml系列稀釋的待測(cè)細(xì)胞因子(IL-2或IL-3)樣品或細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品,在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
4.每孔加20μl MTS/PMS混合液,繼續(xù)培養(yǎng)3~4小時(shí)顯色。
5.檢測(cè)前搖晃培養(yǎng)板10秒鐘,混勻顏色。在酶聯(lián)檢測(cè)儀上,波長(zhǎng)570nm(或490nm,或570nm和690nm)處檢測(cè)各孔的光吸收值(OD)。用樣品稀釋度對(duì)OD值(OD570、OD490或OD570/OD690)繪制劑量-反應(yīng)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算樣品中細(xì)胞因子的量。