1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)液將K562細(xì)胞配成1×105/ml濃度。用同樣培養(yǎng)液將PBMC配成1×106/ml濃度。
2．取96孔圓底細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加0.1ml K562細(xì)胞懸液；每孔加適量PBMC使效靶比為1：1～5：1，每種處理3個(gè)復(fù)孔；3個(gè)對(duì)照孔只加效應(yīng)細(xì)胞；8個(gè)對(duì)照孔只加靶細(xì)胞；4個(gè)對(duì)照孔只加細(xì)胞培養(yǎng)液。每孔加20μl Alamar Blue；每孔總量為0.2ml。
3．在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
4．直接在熒光檢測(cè)儀上檢測(cè)熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長(zhǎng)530nm，發(fā)射波長(zhǎng)590nm。各孔熒光強(qiáng)度值應(yīng)減去培養(yǎng)液對(duì)照熒光強(qiáng)度的平均值，各復(fù)孔熒光強(qiáng)度的平均值記為AF。按下式計(jì)算特異性殺傷百分比：
特異性殺傷（％）＝100×[AF靶細(xì)胞對(duì)照－（AF實(shí)驗(yàn)孔－AF效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照）]/AF靶細(xì)胞對(duì)照