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巨噬細(xì)胞培養(yǎng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。巨噬細(xì)胞容易獲得,便于培養(yǎng),并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養(yǎng),難以長(zhǎng)期生存。
巨噬細(xì)胞也建有無(wú)限細(xì)胞系,大多來(lái)自小鼠,如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等,均獲惡性,培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難以建株。
培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來(lái)源來(lái)獲取細(xì)胞,以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用,其法如下:
1、實(shí)驗(yàn)前三天,向小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯lml(勿注入腸內(nèi)!),以刺流產(chǎn)生大量的巨噬細(xì)胞。
2、引頸處死小鼠。
3、手提鼠尾將其全浸入70%乙醇中3-5秒。
4、置動(dòng)物于解剖臺(tái),用針頭固定四肢,持鑷撕開(kāi)腹部皮膚,但勿傷及腹膜壁,把皮膚拉向上下兩側(cè),暴露出腹膜壁。
5、用70%酒精擦洗腹膜壁,注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同時(shí)用手指從兩側(cè)壓揉腹膜壁,使液體在腹腔內(nèi)流動(dòng)。
6、用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側(cè).使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。
7、小心拔出針頭,把液體注入離心管。
8、4℃下250g離心10分鐘后,去上清,加10ml Eagle培養(yǎng)基。
9、計(jì)數(shù)細(xì)胞。每只鼠可產(chǎn)生20一30×106細(xì)胞,其中90%為巨噬細(xì)胞。
10、以3×105個(gè)貼附細(xì)胞/平方厘米接種。
11、接種數(shù)小時(shí)后,除去培養(yǎng)液,可去除其它白細(xì)胞,純化培養(yǎng)細(xì)胞,用Eagle液沖洗1一2次,再加新Eagle培養(yǎng)液置CO2溫箱中。
 
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