瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳可用于分離、鑒定和提純DNA片段。本法操作簡(jiǎn)單、迅速，能分辨其它方法不能分開的DNA片段混合物，分開的DNA可用低濃度的螢光染料（0.5μg/ml溴化乙錠）染色，在紫外燈下直接觀察檢測(cè)少至1ng的DNA。
DNA通過(guò)瓊脂糖凝膠的遷移率取決于以下參數(shù)：
①DNA分子的大小
線狀雙鏈DNA分子通過(guò)凝膠的速率與其分子量的常用對(duì)數(shù)成反比。據(jù)此用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和待測(cè)分子量的DNA片段同時(shí)電泳，比較其電泳速率，即可求出待測(cè)片段的分子大小。
②瓊脂糖濃度：
給定大小的DNA片段，以不同速度通過(guò)不同濃度的瓊脂糖凝膠。因此利用不同濃度的凝膠，可分辨范圍廣泛，大小不同的DNA片段。
③DNA構(gòu)型
相同分子量的閉環(huán)（Ⅰ型），開環(huán)（Ⅱ型）和線狀（Ⅲ型）DNA，以不同速率通過(guò)凝膠，一般情況下，遷移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。
④應(yīng)用的電壓
在低電壓時(shí)，線狀DNA片段的遷移率與所用電壓成正比。但是電壓增高時(shí)，大分子量DNA片段遷移率的增大是不同的，因此瓊脂糖凝膠的有效分離范圍隨電壓增大而減小。為了獲得DNA片段的最大分辨力，凝膠電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)5V/cm。