采用RNA變性電泳法檢測(cè)RNA質(zhì)量,方法如下:
⑴ 凝膠制備：
制備1.2%瓊脂糖凝膠（電泳槽體積為50ml）
① 稱(chēng)取0.6g瓊脂糖，加入43.5ml水，加熱溶解并降溫到60℃。
② 加入5ml 10×甲醛變性電泳緩沖液，并加入1.5ml 37%的甲醛，混合均勻。
③ 倒入電泳槽中制膠（甲醛有毒，制膠應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行）。
⑵ RNA模板準(zhǔn)備（5~7.5μg total RNA）
① 制備如下混合液 （9.7μl）
10×甲醛變性電泳緩沖液： 1.25μl
37%的甲醛： 2.2μl
甲酰胺： 6.25μl
② 加入2.8μl RNA，使總體積達(dá)到12.5μl
③ 混合后離心5~10 sec（1 000~2 000 r/min）
④ 55℃加熱15 min
⑤ 加入2.5μl甲醛凝膠加樣緩沖液，再加點(diǎn)EB（約0.2~0.5μl），混合后離心5 sec
⑥ 將樣品加入點(diǎn)樣孔
⑦ 在5v/cm的電壓下電泳至溴酚藍(lán)帶跑到電泳槽中央（20cm長(zhǎng)電泳槽，用95v電壓，1小時(shí)左右）
