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PCR技術的拓展

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

1.逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)用來擴增RNA的方法。

2.競爭逆轉(zhuǎn)錄PCR(competitive reverse transcription-polymerase chain rection C-RT-PCR)低豐度RNA定量的好方法。

3.多重PCR(multiples PCR)在同一PCR體系中加入多對引物可用于基天長度很長,發(fā)生多處缺失的檢測。擴增同一模板的幾個區(qū)域。

4.多種PCR可同時加入多套以生物素標記的引物起進手PCR反應。

5.反向PCR(iverse polymerase chain reaction)對一個已知的DNA片段兩側(cè)的未知序列進行擴增和研究。

6.不對稱PCR在擴增循環(huán)中引入不同引物濃度,以得到單鏈DNA并進行列測定,以了解目的基因的序列。

7.錨定PCR(anchored polymerase chain reaction)幫助克服序列未知或序列未全知帶來的障礙。在未知序列未端添加同聚物尾序,將互補的引物連接于一段帶限制性內(nèi)切酶位點的錨上,在錨引物和基因另一側(cè)特異性引物的作用下,將未知序列擴增出來。

8.著色互補試驗或熒光PCR(color complementation assay or fluorescent PCR)原理是用不同熒光染粒,分別標記于不同寡核苷酸引物上,同時擴增多個DNA片段,反應完畢后,利用分子篩選去多余的引物。用紫外線照射擴增產(chǎn)物,就能顯示某一DNA區(qū)帶熒光染料顏色的組合,如果某一DNA區(qū)帶熒光染色料顏色的組合,如果某一DNA區(qū)帶缺失,則會缺乏相應的顏色。

9.雙溫PCR(two-temperature PCR)僅僅執(zhí)行兩步溫度程序。合并退火與延伸溫度。一般常用溫度是94-95℃和46-47℃?梢蕴岣叻磻乃俣群吞禺愋。

10.原位PCR技術:PCR雖然能擴增包括福爾馬林固定、石蠟包埋組織的各種標本的DNA,但擴增的DNA或RNA產(chǎn)物不能在組織細胞中定位,因而不能直接與特定的組織細胞特征相聯(lián)系,這是該技術一個局限性。原位雜交雖具有良好的定位能力,但由于其敏感性問題,尤其是在石蠟切片中,尚不能檢測出低含量的DNA或RNA序列。而原位PCR(In situ PCR,簡稱IS PCR),它可使擴增的特定DNA片段在分離細胞和組織切片中定位,從而彌補了PCR和原位雜交的不足,具有良好的應用前景。目前,已有多種設計的原位PCR擴增儀系統(tǒng)問世,使操作簡便,軟件靈活,已成為拉增固定細胞和石蠟包埋組織中特定DNA和RNA序列的有用工具。

 
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