由于MRNA-PCR定量需經(jīng)兩個(gè)酶（RT和Taq）催化，因而影響因素較多。1989年Wang等報(bào)道了低豐度mRNA絕對(duì)定量方法。利用濃度已知且與待測(cè)靶mR-NA序列相同的內(nèi)對(duì)照mRNA（其片段長(zhǎng)短不同，便于PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物的分離），在同一體系中，用相同的由32P標(biāo)記的引物與待測(cè)mRNA一同進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后，分別測(cè)定二者產(chǎn)物放射性強(qiáng)度，由預(yù)先制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出每個(gè)樣本特異mRNA的量。Gilliland等的結(jié)果表明，在1ng總RNA中可以對(duì)小于1pg的特異mRNA進(jìn)行定量。這一定量方法在腫瘤、代謝失調(diào)、基因表達(dá)調(diào)控等研究中均有重要意義。
