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反向PCR的局限

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
反向PCR在研究轉(zhuǎn)座因子、反轉(zhuǎn)錄病及其他 能與基因組DNA整合或易位的DNA序列中有許多重要應(yīng)用。這些應(yīng)用包括序列的易位、 轉(zhuǎn)座和基因融合,其中之一是已知序列,例如癌基因或免疫系統(tǒng)的基因組成。在所有 這些情況中,如已知序列插入未知序列或與未知序列并列,反向PCR可用于測定未知 邊側(cè)序列。反向PCR的主要優(yōu)點是簡單快速,可以研究許多獨立克隆。其某些應(yīng)用適 合于臨床診斷。
  反向PCR的局限之一是由未知邊側(cè)序列性質(zhì)引起的,需用幾種酶試驗以選擇產(chǎn)生 大小合適的片段的內(nèi)切酶。另一局限是許多常用內(nèi)切酶也在不適當(dāng)位點裂解載體序 列。但一旦確定合適的內(nèi)切酶,反向PCR方法是直接了當(dāng)和可靠的。
 大多數(shù)真核基因組含大量中度或高度重復(fù)序列,YAC或科斯粒中未知接點序列有時也 包括這些序列。通過反向PCR擴增得到的探針可與許多基因組序列雜交,但它們在用 于染色體的步查或跳查方面會受到限制,在這種情況下,需要進行亞克隆。
 
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