1.取材:取外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊,以角化層薄者為佳,早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好,切成0.5~1平方厘米小塊。
2.EDTA處理:先置入0.02%EDTA中室溫置5分鐘。
3.冷消化:換入0.25%胰蛋白酶中,置4℃過(guò)夜。
4.分離:取出皮膚,用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開(kāi)。
5.溫消化:取出表皮單獨(dú)處理,用剪刀剪成更小的塊后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分鐘。
6.用吸管輕輕反復(fù)吹打,使成細(xì)胞懸液。
7.培養(yǎng)液:通過(guò)80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過(guò)后,低速離心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成細(xì)胞懸液,接種入碟皿中,CO2溫箱培養(yǎng)。
2.EDTA處理:先置入0.02%EDTA中室溫置5分鐘。
3.冷消化:換入0.25%胰蛋白酶中,置4℃過(guò)夜。
4.分離:取出皮膚,用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開(kāi)。
5.溫消化:取出表皮單獨(dú)處理,用剪刀剪成更小的塊后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分鐘。
6.用吸管輕輕反復(fù)吹打,使成細(xì)胞懸液。
7.培養(yǎng)液:通過(guò)80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過(guò)后,低速離心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成細(xì)胞懸液,接種入碟皿中,CO2溫箱培養(yǎng)。