外顯子擴增

外顯子擴增(exon amplification) 是以RNA剪接為基礎的快速而有效地克隆外顯子的方法。所用的載體pSPLl的結構特點是外源片段的克隆位點處在一個內含子序列中，內含子序列的兩側是人免疫缺陷病毒I(HIVl)tat基因的5’剪接位點和3，剪接位點。在剪接位點兩側的序列中含有兔珠蛋白基因的間隔序列2(1VS2)。將待檢的DNA片段插入載體所攜帶的內含子序列中，然后用來轉染猴腎細胞系COS-7細胞。在細胞內轉錄產生RNA時，如插入片段中有外顯子序列，則該外顯子的剪接位點將同載體上的tat基因內含子的剪接位點配對，于是在成熟的mRNA分子中就包含了待鑒定的外顯子。然后用反轉錄PCR方法將mRNA反轉錄成cDNA后再加以擴增。最后可把待鑒定的外顯子分離出來，進一步克隆基因。