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HM47 鏈球菌乳膠凝集試劑盒(HM47 HKM® Strep)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-08-04  來源:食品伙伴網(wǎng)整理
核心提示:HM47 鏈球菌乳膠凝集試劑盒(HM47 HKM® Strep)

一、用途

HKM®鏈球菌乳膠試劑盒用于對(duì)選擇性平板上分離出的可疑鏈球菌以Lancefield方法進(jìn)行A、B、C、D、FG分群。

從感染鏈球菌病人分離出的大部分鏈球菌具有特異性血清群抗原。鑒定這些菌株包括從培養(yǎng)物中提取和鑒定這些特異性抗原。鏈球菌分群系統(tǒng)試劑盒內(nèi)有可快速提取碳水化合物抗原的酶試劑和可快速鑒定提取出的A、B、C、D、FG特異抗原的系列乳膠試劑。

該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

 

二、原理

試劑盒內(nèi)乳膠試劑顆粒表面包被與鏈球菌AB、C、DFG群碳水化合物抗原分別具有特異性的兔抗體。

從平板上分離的可疑鏈球菌菌落經(jīng)酶試劑培養(yǎng)以提取抗原,提取出的抗原在檢測(cè)板用6種分別含有一種A、B、C、D、FG特異性抗體的乳膠試劑懸液測(cè)試,如果存在某抗原,其對(duì)應(yīng)的乳膠顆粒會(huì)凝集,而其它乳膠試劑則保持光滑狀態(tài)。

 

三、試劑盒組成成分

每個(gè)試劑盒內(nèi)含50次測(cè)試的試劑,試劑瓶標(biāo)簽上標(biāo)有每種試劑的失效期。

HM47a REAG A   試劑A  2.5mL

含有包被鏈球菌A群的兔抗體乳膠顆粒及穩(wěn)定劑和0.099%疊氮化鈉防腐劑的緩沖液。

HM47b REAG B  試劑B  2.5mL

含有包被鏈球菌B群的兔抗體乳膠顆粒及穩(wěn)定劑和0.099%疊氮化鈉防腐劑的緩沖液。

HM47c REAG C  試劑C  2.5mL

含有包被鏈球菌C群的兔抗體乳膠顆粒及穩(wěn)定劑和0.099%疊氮化鈉防腐劑的緩沖液。

HM47d REAG D  試劑D  2.5mL

含有包被鏈球菌D群的兔抗體乳膠顆粒及穩(wěn)定劑和0.099%疊氮化鈉防腐劑的緩沖液。

HM47f REAG F  試劑F  2.5mL

含有包被鏈球菌F群的兔抗體乳膠顆粒及穩(wěn)定劑和0.099%疊氮化鈉防腐劑的緩沖液。

HM47g REAGG  試劑G  2.5mL

含有包被鏈球菌G群的兔抗體乳膠顆粒及穩(wěn)定劑和0.099%疊氮化鈉防腐劑的緩沖液。

 HM47CONTROL +  陽性對(duì)照試劑 1.0mL

含有無活性的鏈球菌A、B、C、D、FG多價(jià)抗原提取物和0.099%的疊氮化鈉防腐劑。

HM47x  ENZ   酶試劑 2×10mL

凍干的酶提取試劑

 

使用說明書

檢測(cè)板

攪拌棒

 

需要的其它材料

l         接種環(huán)

l         塑料或玻璃試管

l         可分裝0.4mL容積的移液器

l         37水浴鍋

l         樣品滴管或移液管

l         實(shí)驗(yàn)室計(jì)時(shí)器

 

四、警告和注意事項(xiàng)

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、不要使用過期產(chǎn)品。

3、不要造成試劑或樣品的交叉污染。

4、按說明書使用試劑盒。

5、不要用嘴吸取試劑或樣品。

6、所有臨床樣品及其培養(yǎng)物均應(yīng)遵循按潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

7、試劑盒內(nèi)作防腐劑使用的0.099%疊氮化鈉應(yīng)小心處理,疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物?捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。

 

五、貯存

檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在28℃,不要凍存。在這種條件下,可保證包裝盒內(nèi)的產(chǎn)品在有效期內(nèi)的有效性。

試劑盒內(nèi)酶提取試劑在加水溶解后,28℃保存時(shí),可使用3個(gè)月。如需延長(zhǎng)保存期,可在溶解后每支試管分裝0.4mL,在-20℃或更低的溫度下凍存可使用6個(gè)月。酶試劑不可重復(fù)解凍和凍存。

 

顯示變質(zhì)的跡象

出現(xiàn)下列情況時(shí),產(chǎn)品可能失效:

l         乳膠試劑出現(xiàn)明顯結(jié)塊,并且強(qiáng)烈搖動(dòng)幾秒鐘后無法消除。

l         陽性對(duì)照試劑或酶試劑出現(xiàn)絮狀或沉淀

l         在規(guī)定時(shí)間內(nèi),陽性對(duì)照試劑與1個(gè)或幾個(gè)乳膠試劑反應(yīng)不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。

l         未接種的酶試劑與乳膠試劑出現(xiàn)凝集反應(yīng)。

不要使用發(fā)生變質(zhì)跡象的產(chǎn)品。

 

六、樣品及其準(zhǔn)備

試劑盒用于檢測(cè)在培養(yǎng)基上經(jīng)過夜培養(yǎng)的可疑鏈球菌菌落。對(duì)于樣品收集及處理、接種及培養(yǎng)用的培養(yǎng)基可參考相關(guān)資料。檢測(cè)的可疑菌落可選取平板上初步分離的培養(yǎng)物或再次轉(zhuǎn)接的新鮮純培養(yǎng)物。不可直接檢測(cè)保存的菌株。溶血特性是鑒定分析中的一個(gè)重要特征,是否作溶血性鑒定分析取決于檢測(cè)的可疑菌落是否來自血基礎(chǔ)培養(yǎng)。

 

七、檢測(cè)過程

質(zhì)量控制:

應(yīng)定期作陽性對(duì)照測(cè)試,以確證檢測(cè)試劑的有效性。

在測(cè)試過程中,應(yīng)準(zhǔn)備好陽性對(duì)照試劑,并代替用酶試劑制成的菌懸液進(jìn)行測(cè)試。陽性對(duì)照試劑應(yīng)與所有的乳膠試劑形成凝集反應(yīng)。如果未出現(xiàn)凝集表明試劑失效。

如果需要作陰性對(duì)照檢測(cè),可用不加培養(yǎng)物的酶試劑代替用酶試劑制成的菌懸液進(jìn)行測(cè)試。

 

測(cè)試程序:

1、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

2、在使用前,加10mL蒸餾水溶解酶試劑。輕輕搖動(dòng),以溶解均勻。每個(gè)試管中分裝0.4mL酶提取液。

3、用接種環(huán)從平板中挑取可疑的鏈球菌菌落加入酶溶液中,制成菌懸液。為保證檢測(cè)結(jié)果,至少應(yīng)取45個(gè)常規(guī)大小的菌落或相當(dāng)?shù)慕臃N量。酶溶液中接種量過多時(shí),可引起非特異性凝集(如13.1.3)。如果菌落微小,應(yīng)洗脫大量菌落。

4、將試管置37水浴鍋中恒溫1015分鐘。恒溫5分鐘時(shí),應(yīng)搖動(dòng)試管。在檢測(cè)前應(yīng)充分振搖試管,以獲得均勻的抗原懸液。

5、在使用前,搖動(dòng)乳膠試劑以形成均勻的懸浮液。然后將各種已搖勻的乳膠試劑分別各滴1滴在6個(gè)不同的反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

6、分別在6個(gè)已滴加乳膠試劑的反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴加1滴酶提取液(或陽性對(duì)照試劑,見“對(duì)照”部分)

7、分別用不同的攪拌棒混勻反應(yīng)環(huán)內(nèi)的2滴試劑,并在整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)涂布均勻。不要用同1支攪拌棒混勻不同反應(yīng)環(huán)內(nèi)的溶液。

8、輕輕搖動(dòng)檢測(cè)板1分鐘上,以充分混合環(huán)內(nèi)的溶液。

9、觀察并記錄凝集結(jié)果,如果存在鏈球菌,應(yīng)會(huì)形成肉眼可見的明顯凝集。

 

八、結(jié)果判斷

1分鐘的反應(yīng)時(shí)間內(nèi),如果形成肉眼可見的凝集,表明菌懸液是陽性。如果提取物中抗原濃度較高,可快速形成大塊凝集顆粒,如果菌懸液提取物中抗原濃度較低,凝集所需時(shí)間較長(zhǎng),凝集的顆粒會(huì)較小。但陽性和陰性反應(yīng)結(jié)果區(qū)別依然較明顯。

如果乳膠試劑保持原來的光滑乳狀,無明顯凝集,說明菌懸液是陰性。如果有不明顯的微弱凝集,應(yīng)忽略,判斷為陰性。

 

預(yù)期結(jié)果

β-溶血的菌落:

1、單個(gè)乳膠試劑凝集表明該菌株鑒定為相應(yīng)的血清群。

以下情況應(yīng)考慮增加其它的驗(yàn)證試驗(yàn):

l         對(duì)于D群菌株,應(yīng)做生化鑒定分析以區(qū)分D群鏈球菌菌株與D群腸球菌(其對(duì)抗生素有較高的抗性)。

l         對(duì)于菌落微小的A、CG群菌株,應(yīng)做生化鑒定以證實(shí)為S.milleri或咽峽炎鏈球菌。

2、多個(gè)乳膠試劑凝集,表明不同群的多個(gè)菌落混合生長(zhǎng),或單一菌株有多個(gè)群的抗原(如D群鏈球菌同時(shí)含有G群抗原)?梢赃M(jìn)一步考慮下列實(shí)驗(yàn):

l         進(jìn)一步分離培養(yǎng)以獲得純菌落重新進(jìn)行測(cè)試。

l         同時(shí)含有D群和G群抗原的菌株應(yīng)進(jìn)一步做生化鑒定以區(qū)分腸球菌與D群鏈球菌菌株(含兩種抗原的腸球菌可能比只含有D抗原的菌株對(duì)抗生素抗性更強(qiáng))。

3、所有乳膠試劑均凝集,可能是加入酶溶液中的接種物過多,或測(cè)試的培養(yǎng)物有污染菌株引起非特異性凝集,(一般情況下,可以通過識(shí)別菌落特征以確認(rèn))?梢赃M(jìn)一步考慮下列實(shí)驗(yàn):

l         使剩余的酶提取物沸騰23分鐘上,冷卻后進(jìn)行重新測(cè)試,可能得到清晰的結(jié)果。

l         減少酶溶液中的接種物,重新測(cè)試。

l         進(jìn)一步分離培養(yǎng),獲得純菌落重新進(jìn)行測(cè)試。

4、乳膠試劑均無明顯凝集,測(cè)試樣品中可能無A、BC、DFG群鏈球菌存在,或存在的數(shù)量低于檢測(cè)限?梢赃M(jìn)一步考慮下列實(shí)驗(yàn):

l         使用較多接種物重新進(jìn)行測(cè)試,特別在懷疑是鏈球菌D群或F群的情況時(shí)。

l         未得到分群結(jié)果的β-溶血鏈球菌,必要時(shí)用生化實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定分析。

 

β-溶血的菌落:

如果出現(xiàn)單一的乳膠凝集結(jié)果顯示為B群或D群,可較好的表明菌株所鑒定的結(jié)果。如果結(jié)果顯示為A、C、FG群,則不能說明菌株為所鑒定的結(jié)果,應(yīng)采用其它鑒定方法。

 

可以考慮增加以下程序:

l      如果結(jié)果顯示為D群,應(yīng)做進(jìn)一步的生化鑒定以區(qū)分腸球菌與D群鏈球菌。

其它相關(guān)結(jié)果應(yīng)參考以上信息進(jìn)行判斷。

 

九、使用的局限性

結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床或?qū)嶒?yàn)室信息進(jìn)行判斷。精確的結(jié)果依賴于適當(dāng)?shù)木隄舛。偶爾可能?huì)存在下列情況:部分D群菌株的特征性抗原含量低或較微量。某些F群菌株較難從平板表面挑起,瓊脂培養(yǎng)基上添加0.51%1%的葡萄糖可促進(jìn)D群抗原的產(chǎn)生。添加葡萄糖會(huì)影響溶血現(xiàn)象的觀察。但當(dāng)血清群的鑒定非常重要時(shí)值得考慮添加葡萄糖。

 

菌落較小的菌株培養(yǎng)時(shí)增加二氧化碳的含量可促進(jìn)生長(zhǎng)。

 

鏈球菌QRS群可能也含有可檢測(cè)水平的D群抗原。

據(jù)報(bào)道,某些不相關(guān)的屬種含有類似于鏈球菌各群的抗原。例如埃希氏菌、克雷伯氏菌和假單胞菌可引起假陽性結(jié)果。通常情況下,這些菌株可從菌落形態(tài)上加以區(qū)別,不會(huì)造成鑒定時(shí)的混淆。

 

十、檢測(cè)效果對(duì)比

HKM®鏈球菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果對(duì)比,用二種產(chǎn)品檢測(cè)各獨(dú)立地點(diǎn)的臨床樣品。綜合結(jié)果如表1。

 

HKM®

總計(jì)

陽性

陰性

另一廣泛使用的乳膠試劑盒

陽性

607

55

662

陰性

0

24

24

總計(jì)

607

79

686

靈敏度 607/66292%

特異性 24/24100%

 

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性:通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次,最終效價(jià)由參考/對(duì)照抗原測(cè)定,并且3次定性分析結(jié)果完全一致。

批間的重復(fù)性:通過以系列稀釋度的參照抗原對(duì)10批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。批次間,最終效價(jià)無差異及定性分析結(jié)果為100%一致性。

廣東環(huán)凱微生物科技有限公司  電話:020-32077703
編輯:foodnews

 
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