一般地說,根據樣品的性質決定采用何種液相色譜方法,然后再選擇不同類型的柱。即不同類型的柱則代表了不同的色譜方法。
不同種類色譜柱的差異在于柱結構、柱填料和柱尺寸的不同。
色譜柱有不同的尺寸(長度和內徑),分制備型、常規(guī)分析型和微型。不同類型柱的硬件也不同,(包括接頭、柱管等方面),還有徑向加壓柱和夾套加熱柱等。
不同液相色譜法的尺寸根據需要可以選取,普通分析3~30cm長,內徑4~8mm。常用20cm長、4.6mm內徑的柱。制備型柱內徑一般為8mm、25cm長。微型柱內徑l~3mm,長10~20cm。不同的填料分析的效果可能不同,這是因為生產過程不同所致。同一廠商生產的同種填料因批號不同也會有差異,這種差異可能從基質就開始(表面積、雜質、特殊處理),還有鍵合的化學物質(一氯或三氯硅烷反應劑),不同廠家生產的填料還會因專利技術(預處理、鍵合過程、填裝技術)等不同而呈現(xiàn)較大差異。由于種種差異、僅能假設同一批號的柱有基本相同的性質。
多數柱填料基質采用多孔硅膠微粒,通常有球形和無定形兩種,具有不同的粒度、孔徑和表面積。多孔聚合物微粒也適用于反相色譜。聚合物柱的流動相范圍廣,流動相pH值可在1至13之間。而硅膠基質pH僅能在2.5和7之間。顯然,聚合物柱要好一些,但目前仍是以硅膠基質的柱為主。原則上,聚合物柱可以克服硅膠基質柱的某些不足,但需要大量的實驗來證實,要進一步考查聚合物基質填料的全面優(yōu)越性。
在實際工作中,選擇性能良好的色譜柱可得到好的結果,首先要注意柱徑、長度、填料種類和填料粒度。
評價色譜柱的好壞不僅只是N數,還應考慮組分在柱上的保留、鍵合相表面的物性、柱壓降以及峰不對稱因子As等。每一根新色譜柱都應標出詳細參數,主要內容包括公司名稱、柱名稱(商標)、柱填料、尺寸。附一張標準參考色譜圖,并標出色譜條件、樣品名稱、流動相組成、流速、柱溫、進樣體積、檢測器、峰的保留時間及峰名稱等。評價一根色譜柱的主要指標是:①塔板數N值;②峰不對稱因子As;③柱壓降;④鍵合相濃度。