Agilent1100液相基本操作步驟 一、開(kāi)機(jī)： 1、打開(kāi)計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows NT （或Windows 2000）畫(huà)面,并運(yùn)行Bootp Server程序。 2、打開(kāi) 1100 LC 各模塊電源。 3、待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1100LC 通訊，進(jìn)入的工作站畫(huà)面如下所示。 4、從“View”菜單中選擇“MethodRun control”畫(huà)面, 單擊”View”菜單中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面。 5、把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。 6、打開(kāi)Purge閥。 7、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面。 8 、設(shè)Flow：5ml/min，單擊OK。 9、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump control選項(xiàng)，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開(kāi)始Purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止。 10、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump Control選項(xiàng)，選中Off，單擊Ok關(guān)泵， 關(guān)閉 Purge valve。 11、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入Pump編輯畫(huà)面，設(shè)Flow：1.0ml/min。 12、單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如圖所示（以二元泵為例），輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積。單擊Ok。 （二）數(shù)據(jù)采集方法編輯： 1、開(kāi)始編輯完整方法： ● 從“Method”菜單中選擇“Edit entire method” 項(xiàng)，如上圖所示選中除“Data analysis ”外的三項(xiàng)，單擊Ok，進(jìn)入下一畫(huà)面。 2、方法信息： ● 在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。 ● 單擊Ok 進(jìn)入下一畫(huà)面。 3、泵參數(shù)設(shè)定：（以二元泵為例） ● 在“Flow”處輸入流量,如1ml/min，在“Solvent B”處輸入70.0,A=100-B ,也可Insert 一行”Timetable” ,編輯梯度。在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。 ● 單擊Ok進(jìn)入下一畫(huà)面。 4、自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定: ● 選擇合適的進(jìn)樣方式, 如圖所示，進(jìn)樣體積 1.0ul ,洗瓶位置為6號(hào)。“Standard Injection”－－－－只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無(wú)洗針功能。“Injection with Needle Wash”－－－－可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在洗瓶中洗針。“Use injector program”－－-可以點(diǎn)擊Edit 鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。 ● 點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫(huà)面。 5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定: ● 在”Temperature”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點(diǎn)擊”more>>” 鍵,如圖所示,選中”Same as left”－－-使柱溫箱的溫度左右一致。 ● 點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫(huà)面。 6、VWD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: ● 在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng),如254nm, 在”Peak width Response time”下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間, 如>0.1min 2s。 ● 在Timetable 中可以“Insert”一行，輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)，如1min ，波長(zhǎng)=300nm。點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫(huà)面。 7、DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: ● 檢測(cè)波長(zhǎng): 254nm,BW=30nm, 參比波長(zhǎng)=350nm,BW=100nm; ● 檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬BW： 一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域。參比帶寬BW：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。Peak width（Response time）：其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬。Slit—狹縫窄，光譜分辨率高；寬時(shí)，噪音低。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。選中所用的燈。 ● 點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫(huà)面。 8、 RID檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: ● 色譜條件: 進(jìn)樣體積: 20ul 。 光學(xué)單元溫度: Off 。 極性: 正 。 峰寬響應(yīng)時(shí)間 : 4s 。 ● 如圖所示: “Optical Unit Temperature”－－-若環(huán)境溫度控制在±2℃,設(shè)定為Off, 若環(huán)境溫度不穩(wěn)定,則設(shè)定光學(xué)單元溫度為高于環(huán)境溫度5度,以防樣品在池中沉淀。“Peak width”－－-大多數(shù)分析設(shè)為4S，只有在高速分析下設(shè)為更短。“Automatic recycling after analysis”－－-在不進(jìn)行分析時(shí)可以讓流動(dòng)相循環(huán)，節(jié)省流動(dòng)相，檢測(cè)器連續(xù)運(yùn)行，可隨時(shí)投入使用。 ● ＊＊＊＊＊ 點(diǎn)擊RID圖標(biāo)，選擇RID Control ：Heater 設(shè)為On，若要循環(huán)流動(dòng)相，必須將“Recycling Valve”設(shè)為ON。手動(dòng)purge 參比池，將其設(shè)為On，并輸入Purge 時(shí)間。 9、 FLD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: 色譜條件： ● 樣品：P/N 01018-68704 用甲醇稀釋為1:10。 ● 進(jìn)樣體積：5ul。 ● 柱溫箱: 30℃ 。 EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。 ● 響應(yīng)時(shí)間=4s. 停止時(shí)間： 出峰完畢。 ● Excitation A: 激發(fā)波長(zhǎng):200-700nm,步長(zhǎng)為1nm,或Zero Order。 ● Emission: 發(fā)射波長(zhǎng): 280-900nm, 步長(zhǎng)為1nm,或Zero Order。 ● PMT: 大多數(shù)應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑O(shè)定值為10,若高濃度樣品峰被切平頭,則減少 PMT 值。 ● “Peak width”：大多數(shù)應(yīng)用設(shè)為4s，只有快速分析采用小的設(shè)定值。 ● Multi Ex ： 多波長(zhǎng)及光譜（激發(fā)）。 ● Multi Em：多波長(zhǎng)及光譜（發(fā)射）。 ● 同時(shí)可以輸入范圍Range、步長(zhǎng)step、采集光譜。 10、 在“ Run time checklist ”中選中“Data acquisition”，單擊Ok。 11、 單擊“Method”菜單，選中“Save method as”，輸入一方法名，如“test”，單擊Ok。 12、 從菜單 “View”中選中”Online signal” ,選中Windows 1,然后單擊Change 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊Ok.如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)12,選中 Windows 2。 13、 從“Run control ”菜單中選擇“Sample info”選項(xiàng)，如上圖所示，輸入操作者名稱，在“Data file ”中選擇“Manual”或“Prefix”。 區(qū)別: Manual－－每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 Prefix—在Prefix 框中輸入前綴，在Counter 框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd0001，vwd0002……。 14、 從Instrument 菜單選擇System on。 15、 等儀器Ready，基線平穩(wěn)，從Method菜單中選擇“Run method”，進(jìn)樣。 （DAD, VWD色譜圖如下所示：） （三）、數(shù)據(jù)分析方法編輯: 1、 從“View”菜單中，單擊“Data analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫(huà)面。 2、 從“File”菜單選擇“Load signal”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。單擊Ok。 3、 做譜圖優(yōu)化,從“Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項(xiàng)，。從Ranges中選擇Auto scale及合適的顯示時(shí)間，單擊ok,或選擇”Use Ranges” 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。 4、積分: 1、從“Integration”中選擇 “Auto integrate”,如積分結(jié)果不理想,再?gòu)牟藛沃羞x擇“Integration Events”選項(xiàng)，選擇合適的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。 2、從“Integration”菜單中選擇“Integrate”選項(xiàng)， 則數(shù)據(jù)被積分。 3、如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。 4、單擊左邊“√”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。 5、打印報(bào)告: 1、從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項(xiàng)，進(jìn)入如上畫(huà)面。 2、單擊“Quantitative Results”框中Calculate右側(cè)的黑三角，選中Percent（面積百分比），其它選項(xiàng)不變。 3、單擊Ok. 4、從“Report”菜單中選擇“Print report”，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則單擊Report 底部的“Print”鈕。 四、關(guān)機(jī): ● 關(guān)機(jī)前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如ACN），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇�沖洗] ● 退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用shut down關(guān)）。 ● 關(guān)掉Agilent 1100電源開(kāi)關(guān)。