六通閥進樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進樣器,了解和掌握六通閥的工作原理有利于對它的使用和維護,延長其使用壽命。然而很多實驗操作人員對六通閥的工作原理模棱兩可,缺乏準(zhǔn)確的認(rèn)識,今天小編就給大家?guī)碓敿?xì)的六通閥進樣器工作原理圖文介紹。
六通閥進樣器是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。當(dāng)在充樣(Load)位置時,從進樣孔充樣進定量環(huán),多余樣品從放空孔排出;轉(zhuǎn)動至進樣(Inject)位置時(將六通閥轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動60°),由泵輸送的流動相沖洗定量環(huán),推動樣品入柱。六通閥進樣器最為通用,各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進樣器。
六通閥進樣器的工作原理主要分為兩步,分別是上樣和進樣,如下圖所示。其中,紅色虛線表示定量環(huán)。首先,使用泵將流動相從1號壓入,通過2號進入色譜柱中,使之在色譜系統(tǒng)中形成穩(wěn)定的流路;然后樣品經(jīng)進針口從3號注射進定量環(huán)中,定量環(huán)中充滿后,多余的樣品液從5號放空孔排出,此時進樣完成。
待樣品進入定量環(huán)后,1號閥與6號閥接通,2號閥和3號閥接通,由泵輸入的流動相沖洗定量環(huán),將待測樣品沖入色譜柱中進行分離檢測。
下面的圖示更直觀地介紹了六通閥進樣器的工作原理。
流動相與色譜柱構(gòu)成封閉環(huán)路,樣品從進樣口注入,進入定量環(huán)中,多余的以廢液形式排出。
待樣品完全進入后,六通閥改變閥之間的連接方式,將流動相入口與定量環(huán)接通。
流動相通過定量環(huán),將待測樣品沖入色譜柱中。
再次改變六通閥的連接方式,重新連回初始狀態(tài),通過流動相的洗脫對待測樣品進行分離檢測。
外部六個接口由中間的某部件兩兩聯(lián)通,關(guān)閉時是左邊這樣,打開時中間聯(lián)通的部件轉(zhuǎn)動60°,變成右邊這樣。
然后再說外部的連接。平時的整個氣路系統(tǒng)(進氣部分氣路也可能是進樣口,用微量進樣器打進去。另外這里說的是氣相色譜,液相可能略有不同。)是下面這個樣子。其中兩個分別連進樣口和尾氣,兩個連色譜柱,剩下的兩個互相連起來,中間定量環(huán)這段管中的樣品就是用來進樣的。
紅色是你的樣品,直接從進樣口進去然后就吹出去了。藍(lán)色是色譜柱里面的載氣。
然后你點了一下進樣,咔嚓,六通閥一開,整個系統(tǒng)馬上變成下面這樣:
然后你點了一下進樣,咔嚓,六通閥一開,整個系統(tǒng)馬上變成下面這樣:
定量環(huán)改成連接在了色譜柱的兩端,于是載氣將中間殘留的一段樣品帶入色譜柱。
雖然六通閥進樣器具有結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、壽命長、日常無需維修等特點,但正確的使用和維護將能增加使用壽命,保護周邊設(shè)備,同時增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑,六通閥進樣器一般可連續(xù)進樣3萬次而無需維修,以下淺談有關(guān)六通閥進樣器的使用及保養(yǎng)事宜:
1、如果扳閥處于Load和Inject之間,便阻死了液流,壓力驟增,再轉(zhuǎn)到進樣位,過高的壓力在柱頭上引起損壞,所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動閥,不能停留在中途。
在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜,是平頭注射器。一方面,針頭外側(cè)緊貼進樣器密封管內(nèi)側(cè),密封性能好,不漏液,不引入空氣;另一方面,也防止了針頭刺壞密封組件及定子。
2、六通閥進樣器的進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。
使用部分裝液法進樣時,進樣量最多為定量環(huán)體積的75%,如20μl的定量環(huán)最多進樣15μl的樣品,并且要求每次進樣體積準(zhǔn)確、相同;使用完全裝液法進樣時,進樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍,即20μl的定量環(huán)最少進樣60至100μl的樣品,這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液,達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100μl的平頭進樣針配合20μl滿環(huán)進樣。
3、可根據(jù)進樣體積的需要自已制作定量環(huán),一般不要求精確計算定量環(huán)的體積。
譬如,一根名義上10μl的定量環(huán),實際是9μl還是10μl并不重要,因為被測樣品和校正樣品的進樣體積保持一致,在計算結(jié)果時誤差都被抵消了。
4、進樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進樣閥的物質(zhì),樣品溶液均要用0.45μm的濾膜過濾。