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液相色譜柱正確安裝、啟用與維護(hù)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-03-14
核心提示: 色譜柱是液相色譜儀的最核心部件,價(jià)格相對(duì)昂貴,如避免強(qiáng)烈的碰撞和震動(dòng),不要讓柱床變干,避免在嚴(yán)寒環(huán)境受凍等。之前,
 色譜柱是液相色譜儀的最核心部件,價(jià)格相對(duì)昂貴,如避免強(qiáng)烈的碰撞和震動(dòng),不要讓柱床變干,避免在嚴(yán)寒環(huán)境受凍等。

之前,我們先了解一下液相色譜柱的基本結(jié)構(gòu),色譜柱由接頭、螺帽、柱管、填料、墊圈及過(guò)濾片等組成。

01色譜柱安裝、啟用和維護(hù)

01柱頭類型和不銹鋼毛細(xì)管接頭的匹配

色譜柱是消耗品,不是儀器原配的情況很多。如果接頭和柱頭深度不匹配將會(huì)產(chǎn)生漏液或者死體積過(guò)大的現(xiàn)象。接頭比柱頭深度長(zhǎng),不易擰緊而漏液;接頭比柱頭深度短,柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積,使譜帶展寬和峰拖尾。

02溶劑的匹配轉(zhuǎn)換

色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,如果和流動(dòng)相不匹配,使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換。特別是流動(dòng)相含緩沖鹽時(shí),如保存溶劑是純有機(jī)相或有機(jī)相比例高,直接將新柱接入使用,會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出,最嚴(yán)重會(huì)將新柱永久不可逆地?fù)p壞。正相柱保存溶劑一般為正己烷,如果要轉(zhuǎn)換成HILIC柱模式使用,由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好,轉(zhuǎn)換中間需用二氯甲烷或乙酸乙酯過(guò)渡。

03正確使用緩沖鹽

緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱使用壽命非常重要。

正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過(guò)濾,使用后要沖洗。

具體方法如下:

1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0mL/min流速?zèng)_洗10個(gè)柱體積;使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2mL/min流速?zèng)_洗色譜柱過(guò)夜。

2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前,用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)渡流動(dòng)相以1.0mL/min流速?zèng)_洗10個(gè)柱體積。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過(guò)程中緩沖鹽析出。注意:過(guò)渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同,區(qū)別只是過(guò)渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。

3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法:

1)方案1:用甲醇/水=20/80以1.0mL/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min;

2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2mL/min流速反向沖洗色譜柱過(guò)夜。

04新柱使用前的平衡和老化

廠家出廠檢驗(yàn)時(shí)一般都已進(jìn)行過(guò)平衡,但色譜柱到最終用戶時(shí)間不一,用戶正式測(cè)定前最好對(duì)色譜柱再次平衡。最好的平衡兼老化一起進(jìn)行的方法是運(yùn)行幾次完整的分析程序(包括進(jìn)樣),直到觀察到峰形、保留時(shí)間和峰面積穩(wěn)定為止。所謂“老化”是借用了氣相的術(shù)語(yǔ),目的是達(dá)到分析物在色譜柱以及整個(gè)液相系統(tǒng)流路中的吸附飽和。對(duì)某些特定的待測(cè)物,如分子量大于1000的,因擴(kuò)散速度慢,老化時(shí)間相應(yīng)要長(zhǎng),可采取大濃度進(jìn)樣或在同一個(gè)洗脫周期內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣多針的方式加快老化。

05pH使用范圍

一般認(rèn)為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范圍是2-8,這是很粗略的。硅膠類型、使用溫度、硅膠表面所鍵合的固定相類型以及緩沖鹽的不同,對(duì)此均有影響。硅膠比孔容小、鍵合密度大的填料pH耐受范圍要大一些,有些選用高品質(zhì)硅膠,加上高密度鍵合和雙封尾,或特殊工藝使pH耐受范圍最大提高到10。磷酸鹽緩沖鹽滲透力強(qiáng),有加快硅膠溶解的副作用,它的存在會(huì)降低pH使用范圍。有機(jī)雜化硅膠以及硅膠表面涂覆雜化層的硅膠填料,有機(jī)質(zhì)的存在使pH使用范圍能到12以上。拿到柱子第一時(shí)間閱讀說(shuō)明書(shū),確認(rèn)色譜柱內(nèi)的封存液,有條件可以依照COA報(bào)告做柱效測(cè)試。

06色譜柱保存

短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動(dòng)相(不含緩沖鹽)保存為佳,以盡量減少下次使用的平衡時(shí)間。一般只建議在長(zhǎng)期保存反相柱的時(shí)候用純甲醇或乙腈,一方面純有機(jī)相保存有最大限度減少鍵合相水解的作用,但純甲醇(乙腈)又會(huì)將已水解而暫時(shí)吸附在柱內(nèi)的鍵合相洗脫出去,使固定相流失進(jìn)程加快,壽命縮短。純有機(jī)相保存還有易揮發(fā)使柱床變干的缺點(diǎn),使用80%左右有機(jī)相保存也屬好的選擇,且足以避免長(zhǎng)菌。強(qiáng)烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑。

離子交換柱和水性SEC柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,可加0.05%疊氮化鈉溶液防止長(zhǎng)菌。

正相柱,無(wú)論是短期還是長(zhǎng)期,都推薦保存在所用流動(dòng)相中。

編輯:songjiajie2010

 
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