細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出,然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離,也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細胞處理好,根據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基,放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)過程中如果操作不當或者條件控制不合適容易受到化學或者生物因素的污染。凡混入細胞培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應視為污染,細胞污染不能全被消除,但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴重性。細胞污染根據(jù)污染源主要可以分為化學性,物理性和生物性污染。
物理性污染
物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學性污染。
物理性污染通過影響細胞培養(yǎng)體系中的生化成分,從而影響細胞的代謝。培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素,如溫 度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細胞產(chǎn)生影響。細胞、培養(yǎng)液或其它培養(yǎng)試劑暴露于放射線、輻射或過冷過熱的溫度中,可以引起細胞代謝發(fā)生改變,如細胞同步化、細胞生長受抑制甚至細胞死亡。通過實驗室的合理設計及建立規(guī)范的操作規(guī)程,可以減少環(huán)境中物理因素對細胞的影響。孵箱應放在溫度較恒定的環(huán)境中,周圍不能放置能引起機械振動的設備,如離心機。培養(yǎng)液及培養(yǎng)試劑應放在固定的位置,為避免光照試劑不能放在玻璃門的冰箱中,試劑周圍不能放同位素。培養(yǎng)液從冰箱中取出后應在室溫中放置一段時間后再進行實驗,以避免過冷的溫度對細胞的影響。