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培養(yǎng)基的選擇策略

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-06-14
核心提示: 一、培養(yǎng)基概述1.定義培養(yǎng)基是指由人工配制而成的,適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的,微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和
 一、培養(yǎng)基概述

1.定義

培養(yǎng)基是指由人工配制而成的,適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的,微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存用的混合營養(yǎng)基質(zhì)。
微生物的營養(yǎng)要素,即碳源、氮源、能源、生長因子,無機(jī)鹽和水。一方面,如何合理地利用這些營養(yǎng)要素,設(shè)計出合理的培養(yǎng)基配方是個問題;另一方面,設(shè)計出的培養(yǎng)基是否符合微生物的生長需求、代謝物的環(huán)境要求、經(jīng)濟(jì)等方方面面也是問題,都值得我們深入研究。
2.不同狀態(tài)培養(yǎng)基的作用
固體培養(yǎng)基:用于分離、純化、鑒別、技數(shù)和保存微生物菌種等。
液體培養(yǎng)基用于擴(kuò)大培養(yǎng)、搖瓶研究和鑒別性研究。
半固體培養(yǎng)基:用于厭氧菌培養(yǎng)菌分離和培養(yǎng)、觀察微生物運(yùn)動、保藏微生物菌種等。
3.常見培養(yǎng)基
常見的基礎(chǔ)培養(yǎng)基:比如,LB培養(yǎng)基、YPD培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基……
常見的選擇培養(yǎng)基:比如,以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基可用于篩選纖維素降解菌、無氮培養(yǎng)基只能供有固氮能力的固氮菌生長……
常見的鑒別培養(yǎng)基:比如,EMB培養(yǎng)基(伊紅-亞甲藍(lán)培養(yǎng)基)

4.培養(yǎng)基的選擇原則

目的要明確明確培養(yǎng)哪類微生物,產(chǎn)物是什么,用途等等

營養(yǎng)協(xié)調(diào):參考微生物細(xì)胞組成元素

理化適宜:培養(yǎng)基的pH、滲透壓等物理化學(xué)條件較為適宜。

二、微生物培養(yǎng)基的制備

(一)不同微生物的培養(yǎng)條件和最適培養(yǎng)基配方

比如,枯草芽孢桿菌,最適培養(yǎng)條件:37℃、pH7,最適培養(yǎng)基配方:營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;

大腸桿菌,最適培養(yǎng)條件:37℃、pH7,最適培養(yǎng)基配方:LB培養(yǎng)基;

酵母菌,最適培養(yǎng)條件:30℃、pH5,最適培養(yǎng)基配方:YPD培養(yǎng)基;

乳酸菌,最適培養(yǎng)條件:37℃、pH6,最適培養(yǎng)基配方:MRS培養(yǎng)基;

霉菌,最適培養(yǎng)條件:28℃、pH5.5,最適培養(yǎng)基配方:PDA培養(yǎng)基;

鏈霉菌,最適培養(yǎng)條件:28℃、pH5.5,最適培養(yǎng)基配方:高氏1號培養(yǎng)基……

(二)培養(yǎng)基配制的步驟和注意事項
1.液體培養(yǎng)基的配制
培養(yǎng)基的配制跟做菜一樣,一樣都不能落下,需要找原料配料、原料溶解后需要調(diào)節(jié)溶液pH值、分裝、包裝、滅菌等步驟。

(1) 計算:根據(jù)培養(yǎng)基配方,計算實際用量,記錄實際稱量質(zhì)量。用類似表格進(jìn)行記錄。

(2) 稱量:將所有物品放在天平左側(cè),依次稱量各試劑,倒入燒杯中。稱完每種試劑,放到天平右側(cè),標(biāo)記√或×或—。
要選擇合適的天平進(jìn)行稱量,量少選用電子天平,量多選用分析天平,如果是大量的試劑,則選用臺秤。
(3) 溶解:先加入2/3水溶解,待全部溶解后,定容。
(4) 調(diào)節(jié)pH值:除特殊說明,一般用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)溶液pH。
可以用pH試紙也可以用pH計,pH試紙比較粗略,pH計精確但需要經(jīng)常校準(zhǔn)。
(5)分裝:根據(jù)試驗要求,將液體培養(yǎng)基分裝至三角瓶或其他容器內(nèi)。

(6)封口:用透氣膜或棉塞封口。標(biāo)記培養(yǎng)基名稱、日期等。

透氣膜使用方便,一般不重復(fù)使用;棉花塞透氣性好,麻煩不美觀,可以重復(fù)使用,根據(jù)需要使用。
(7)滅菌:將上述配制好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌器中滅菌,設(shè)定合適的溫度和時間。
(8)冷卻:待滅菌完成后,取出,冷卻,冷卻后使用。
(9)整理:將試劑和其他物品放回原處,擦拭臺面。
2.固體培養(yǎng)基的配制
固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的區(qū)別在于:一個是固體,一個是液體;一個加了凝固劑瓊脂粉,另一個沒加凝固劑;固體培養(yǎng)基用于分離、培養(yǎng)、鑒別菌種,液體培養(yǎng)基用于擴(kuò)大培養(yǎng)。
(1)計算:同液體培養(yǎng)基配制。
(2)準(zhǔn)備培養(yǎng)皿:將試管和培養(yǎng)皿洗凈、干燥,使各培養(yǎng)皿蓋方向一致,用牛皮紙或報紙包好,注明皿蓋的方向,高壓蒸汽滅菌或干燥滅菌后烘干備用,也可直接使用一次性無菌培養(yǎng)皿。
玻璃培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用,處理麻煩;一次性培養(yǎng)皿省事,成本高。
(3)稱量:除瓊脂粉外,其余試劑稱量同液體培養(yǎng)基配制。先不稱量瓊脂粉。
(4)溶解:溶解步驟同液體培養(yǎng)基配制。
(5)調(diào)節(jié)pH值:同液體培養(yǎng)基配制
(6)稱量:稱量瓊脂粉,將瓊脂粉與液體混勻。
(7)加熱溶解:在常溫下瓊脂粉不溶,需要加熱溶解,不需要分裝的也可以直接滅菌。
滅菌之后要搖勻,否則瓊脂粉沉在底部,容易不凝固或太硬。
(8)分裝:固體培養(yǎng)基分裝需要在瓊脂粉溶解后進(jìn)行分裝。
試管1/4高度,三角瓶不超過1/2容積,對于好養(yǎng)菌的培養(yǎng),三角瓶容積的1/10,也可根據(jù)目標(biāo)菌的培養(yǎng)條件,適當(dāng)調(diào)整。
(9)口:試管用試管塞封口,然后包上牛皮紙,用皮筋或棉線捆綁;三角瓶用透氣膜或紗布封口,用皮筋或棉線捆綁。標(biāo)記培養(yǎng)基名稱、日期等信息。
硅膠塞透氣性差,使用方便,棉花塞透氣性好,麻煩不美觀,根據(jù)需要使用。

(10)滅菌:將上述配制好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌器中滅菌,設(shè)定合適的溫度和時間。還有部分不能滅菌的試劑,需要采用過濾除菌。

比如,胰蛋白胨和酵母浸粉適合121℃,滅菌20min;葡萄糖適合115℃,滅菌20min,氨芐需要過濾除菌。

(11)冷卻:待滅菌鍋溫度降至80℃以下,取出培養(yǎng)基,輕輕搖勻,準(zhǔn)備倒平板,或擺斜面。
待溫度降至50℃左右,取出尚未凝固的培養(yǎng)基置于超凈工作臺內(nèi),略打開無菌培養(yǎng)皿蓋露一小縫 ),倒入培養(yǎng)基,封蓋、冷凝,凝固后倒置備用。

斜面長度不超過試管的1/2-2/3,斜面過長容易染菌,不能使用,應(yīng)舍棄。

(12)整理:將試劑和其他物品放回原處,擦拭臺面
3.注意事項:
(1)要選擇合適的天平進(jìn)行稱量,量少選用電子天平,量多選用分析天平,如果是大量的試劑,則選用臺秤。
(2)易吸潮的試劑,稱量動作要快。
(3)易與稱量紙粘連一起的試劑,可以將試劑與稱量紙一起放入水中,試劑與稱量紙分離后,取出稱量紙。
(4)詳細(xì)記錄培養(yǎng)基的名稱、配方、來源、各成分的廠家批次,最好保留樣品以備后續(xù)檢驗。
(5)滅菌條件不一致的試劑,要單獨(dú)稱量,單獨(dú)滅菌。
(6)調(diào)節(jié)溶液pH,不能過酸過堿來回調(diào)節(jié),盡量不要調(diào)過,以免影響溶液中離子濃度。
(7)配制試管培養(yǎng)基,要將試管豎起來,不能平放。
(8)試管封口有棉塞、硅膠塞、橡膠塞和試管塞,可以根據(jù)用途,進(jìn)行選擇。
(9)倒平板之前,要靠壁搖勻,不能有氣泡,否則既不美觀,也不實用。
(10)擺斜面時,斜面不能太長,容易污染,斜面太短可以使用,但有點(diǎn)浪費(fèi)空間。
(11)配制好的培養(yǎng)基要盡快滅菌。

編輯:songjiajie2010

 
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