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常見(jiàn)問(wèn)題匯總
01
VRBA培養(yǎng)相關(guān)問(wèn)題 1）所用器皿是否需要滅菌？ 不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌。但必須清洗干凈，表面無(wú)污漬、無(wú)殘留。煮沸完成后，取下錐形瓶，用一般常用的軟紙覆蓋瓶口，并橡皮筋纏繞，待冷卻至適宜溫度后，即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時(shí)，須點(diǎn)燃酒精燈，稍微灼燒錐形瓶口。 2）如何保持“煮沸2min”？ 可以用電磁爐或者電熱板進(jìn)行加熱煮沸，在該培養(yǎng)基即將煮沸時(shí)調(diào)低溫度。實(shí)際操作時(shí)，不需要嚴(yán)格按照此要求進(jìn)行，加熱煮沸數(shù)秒即可。因?yàn)楸九囵B(yǎng)基很難保持煮沸2min，一旦煮沸，則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰，若不調(diào)低問(wèn)題或及時(shí)采取其它措施，則培養(yǎng)基很有可能在數(shù)秒內(nèi)噴涌出來(lái)，嚴(yán)重者可噴涌2米以上、電磁爐周?chē)?-2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍。 3）若培養(yǎng)基未用完，是否可以冷藏起來(lái)下次用？ 不可以。4789.28中已規(guī)定，固體培養(yǎng)基最多允許熔融一次，并且特指經(jīng)過(guò)高壓霉菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后，再次熔融后非常容易噴涌，若溫度控制不當(dāng)，底部培養(yǎng)基熔融后很快就會(huì)發(fā)生噴涌，即培養(yǎng)基未完全熔融就會(huì)發(fā)生噴涌現(xiàn)象。 4）傾注完成后是否需要“覆蓋一層"?如何覆蓋？ 一般情況下不需要覆蓋。在實(shí)際操作過(guò)程中，若檢驗(yàn)員初次接觸該樣品類(lèi)別，則因?yàn)椴淮_定是否會(huì)發(fā)生菌落蔓延，所以有必要在傾注培養(yǎng)基的時(shí)候再覆蓋一層，但如此反復(fù)多次測(cè)試后，若樣品中不存在菌落蔓延情況，則以后的檢驗(yàn)中都不需要進(jìn)行覆蓋。若重復(fù)多次測(cè)試后都有蔓延情況，則以后的檢驗(yàn)中都需要覆蓋，應(yīng)該在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固時(shí)再傾注一層培養(yǎng)基。 02
如何確定培養(yǎng)基上長(zhǎng)得是不是大腸菌群？
03
兩個(gè)梯度都漲了菌，如何選��？
若兩個(gè)連續(xù)梯度的4個(gè)平板上都要挑取菌落進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，實(shí)際操作時(shí)，可靈活操作，如1:10的兩個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為120、123，1:100的兩個(gè)平板的菌落數(shù)分別為16,18，嚴(yán)格來(lái)講必須至少在每個(gè)平板上分別挑取10個(gè)可疑菌落和10個(gè)典型菌落進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，如此需要40根GBLB肉湯管。建議使用鎳合金接種環(huán)，以為VRBA上生長(zhǎng)的菌落大部分在底層、且菌落一般比較大，被培養(yǎng)基覆蓋，傳統(tǒng)的接種環(huán)較細(xì)，用以刮去上層培養(yǎng)基比較方便，挑取菌落也比較方便。
04 如何進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，菌落選取數(shù)量？
建議新手們VRBA上的所有不同形態(tài)的菌落都進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)。每種不同形態(tài)都挑取5-10個(gè)進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)（BGLB管足夠，建議多挑選幾個(gè)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)）。
05
結(jié)果如何計(jì)算？ 首先，在VRBA培養(yǎng)24h后進(jìn)行計(jì)數(shù)，分別計(jì)數(shù)可疑大腸菌群和典型大腸菌群的數(shù)量。假如在1:10的平板上的可疑大腸菌群有10個(gè)，典型大腸菌群有6個(gè)；然后進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，假如10個(gè)可疑大腸菌群中有3個(gè)證實(shí)為陽(yáng)性，6個(gè)典型大腸菌群中有5個(gè)證實(shí)為陽(yáng)性，則計(jì)算方法如下：最終大腸菌群數(shù)=經(jīng)證實(shí)的大腸菌群數(shù)=可疑大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量+典型大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量=10×（3／10）×10+6×（5／6）×10＝80。 06
若平板上有很多菌落，最終證實(shí)全部為陰性，結(jié)果如何計(jì)算？
建議新手們認(rèn)真按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，此證實(shí)實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，每一次VRBA上有菌落生長(zhǎng)都進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，如此往復(fù)3-4次，對(duì)于哪種形態(tài)才是大腸菌群均可了然于心。
選取15-150CFU之間的平板，挑選可疑菌落進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)。舉例如下：
注意：A. 每種可疑菌落挑取5個(gè)，每個(gè)菌落放入1根GBLB管中；B. “產(chǎn)氣者，記為大腸菌群陽(yáng)性管‘’，就要求在實(shí)驗(yàn)前必須認(rèn)真篩選BGLB管，凡產(chǎn)氣的GBLB管應(yīng)棄去不用。
選取適宜菌落數(shù)的平板挑取菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)，若證實(shí)全部為陰性，則需要再挑取更低稀釋度的平板上的菌落，建議可疑和典型菌落分別挑取10個(gè)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，若第二次證實(shí)實(shí)驗(yàn)均呈陰性，以＜1乘以最低稀釋度進(jìn)行計(jì)算。
