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微生物主要通過空氣、原輔材料、作業(yè)人員、制造裝置、包裝容器的途徑來污染產(chǎn)品，而食品微生物的風(fēng)險(xiǎn)管理重在強(qiáng)化過程控制，微生物檢驗(yàn)采樣是過程控制是否滿足要求的判斷依據(jù)。有些食品企業(yè)會(huì)對(duì)產(chǎn)品的成品和原材料進(jìn)行理化和微生物的檢測(cè)。特別是微生物的檢測(cè)就需要注意樣品的采樣流程，包括人員服裝、環(huán)境和取樣方式。不然在抽檢采樣過程中沒注意污染了樣品，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果異常豈不是白費(fèi)功夫？因此，我們今天著重聊聊如何實(shí)施食品微生物檢驗(yàn)采樣以及相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。
采樣方案
目前最為流行的采樣方案為國(guó)際食品微生物規(guī)范委員會(huì)（ICMSF）推薦的采樣方案和隨機(jī)采樣方案，ICMSF的采樣方案是依據(jù)事先給食品進(jìn)行的危害程度劃分來確定的，將食品分成3種危害度：
I類危害，老人和嬰幼兒食品及在食用前可能會(huì)增加危害的食品；
II類危害，立即食用的食品，在食用前危害基本不變；
III類危害，食用前經(jīng)加熱處理，危害減小的食品。
采樣方法是從統(tǒng)計(jì)學(xué)原理來考慮，將檢驗(yàn)指標(biāo)對(duì)食品衛(wèi)生的重要程度分成一般、中等、和嚴(yán)重3檔。根據(jù)以上危害度的分類，又將將采樣方案分成二級(jí)法和三級(jí)法。
二級(jí)法，設(shè)定n、с及m值，采樣數(shù)只設(shè)合格判定標(biāo)準(zhǔn)m值，超過m值的，則為不合格品。例如，生食海產(chǎn)品魚，n=5，c=0，m=10E2，n=5即采樣5個(gè)，c=0即意味著在該批檢樣中，未見到有超過m值的檢樣，此批貨物為合格品。
三級(jí)法則有n、c、m及M值。設(shè)有微生物標(biāo)準(zhǔn)m及M值兩個(gè)限量如同二級(jí)法，超過m值的檢樣，即算為不合格品。其中以m值到M值的范圍內(nèi)的檢樣數(shù)，作為c值，如果在此范圍內(nèi)，即為附加條件合格，超過M值者，則為不合格。
例如：冷凍生蝦的細(xì)菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)n=5，c=3，m=10E1，M=10E2，其意義是從一批產(chǎn)品中，取5個(gè)檢樣，經(jīng)檢樣結(jié)果，允許≤3個(gè)檢樣的菌數(shù)是在m--M值之間，如果有3個(gè)以上檢樣的菌數(shù)是在m--M值之間或一個(gè)檢樣菌數(shù)超過M值者，則判定該批產(chǎn)品為不合格品。
n：系指一批產(chǎn)品采樣個(gè)數(shù)。
c：系指該批產(chǎn)品的檢樣菌數(shù)中，超過限量的檢樣數(shù)，即結(jié)果超過合格菌數(shù)限量的最大允許數(shù)。
m：系指合格菌數(shù)限量，將可接受與不可接受的數(shù)量區(qū)別開。
M：系指附加條件，判定為合格的菌數(shù)限量，表示邊緣的可接受數(shù)與邊緣的不可接受數(shù)之間的界限。
現(xiàn)場(chǎng)采樣注意事項(xiàng)
確定了采樣方案以后，采樣方法對(duì)采樣方案的有效執(zhí)行和保證樣品的有效性代表性至關(guān)重要。
1、采樣必須遵循無菌操作程序，采樣工具如整套不銹鋼勺子、鑷子、剪刀等應(yīng)當(dāng)高壓滅菌，防止一切可能的外來污染。
2、容器必需清潔、干燥、防漏、廣口、滅菌，大小適合盛放檢樣。
3、采樣全過程中，應(yīng)采取必要的措施防止食品中固有微生物的數(shù)量和生長(zhǎng)能力發(fā)生變化。
4、確定檢驗(yàn)批，應(yīng)注意產(chǎn)品的均質(zhì)性和來源，確保檢樣的代表性。
5、當(dāng)用自動(dòng)采樣器取不需要冷卻的粉狀或固定食品時(shí)，必須履行相應(yīng)的管理辦法，保證產(chǎn)品的代表性不被人為地破壞。
現(xiàn)場(chǎng)采樣工作要求
1．直接食用的小包裝食品：盡可能取原包裝，直到檢驗(yàn)前不要開封，以防污染。
2．液體樣品：
（1）.采樣前搖動(dòng)或用滅菌棒攪拌液體，盡量使其達(dá)到均質(zhì)；
（2）.以無菌操作開啟包裝,用100mL無菌注射器抽取,注入無菌容器。
（3）.如為非冷藏易腐食品，應(yīng)迅速將所采樣品冷卻至0-4℃。
3 半固體樣品：以無菌操作拆開包裝,用無菌勺子從幾個(gè)部位挖采樣品,放入無菌容器。
4.固體樣品：
（1） 每份樣品應(yīng)用滅菌采樣器由幾個(gè)不同部位采取，一起放入一個(gè)滅菌容器內(nèi)；
（2） 大塊整體食品應(yīng)用無菌刀具和鑷子從不同部位割取,割取時(shí)應(yīng)兼顧表面與深部,注意樣品的代表性; 小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切采樣品,放入無菌容器。
（3） 若為檢驗(yàn)食品的污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)的情況，應(yīng)從深部采樣。
（4） 注意不要使樣品過度潮濕，以防食品中固有的細(xì)菌增殖。
5.冷凍樣品：
（1）對(duì)大塊冷凍食品，應(yīng)從幾個(gè)不同部位用滅菌工具采樣，使之有充分的代表性。
（2）大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采取;大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削采樣品或用無菌小手鋸從凍塊上舉采樣品,也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品,放入容器。
（3）冷凍食品的采樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康?/font>,若需檢驗(yàn)食品污染情況,可取表層樣品;若需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況,應(yīng)取深部樣品。
（4）在將樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。
6.生產(chǎn)過程中的采樣：
(1)車間用水。自來水樣從車間各水龍頭上采取冷卻水;湯料等從車間容器不同部位用100mL無菌注射器抽取。如用固定在貯液桶或流水作業(yè)線上的采樣龍頭采樣時(shí)，應(yīng)事先將龍頭消毒；
(2)車間臺(tái)面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。用5cm2孔無菌采樣板及5支無菌棉簽擦拭25cm2面積。若所采表面干燥,則用無菌稀釋液潤(rùn)濕棉簽后擦拭;若表面有水,則用干棉簽擦拭,擦拭后立即將棉簽頭用無菌剪刀剪入盛樣容器。
(3)車間空氣采樣（空氣塵降法）。將5個(gè)直徑90mm的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板分別置于車間的四角和中部,打開平皿蓋,暴露采樣后，蓋蓋送檢。
（4）設(shè)備采樣
涂抹法：（適用于表面平坦的設(shè)備和工器具產(chǎn)品接觸面）取經(jīng)過滅菌的50cm2鋁片框放在需檢查的部位上，用無菌棉簽蘸上無菌生理鹽水擦拭后放入盛樣容器。
貼紙法：（適用于表面不平坦的設(shè)備和工器具接處面）將兩張紙面積共50cm2的無菌規(guī)格紙用無菌生理鹽水泡濕后，分別貼于需測(cè)部分，后放入盛樣容器。
國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)
2017年以來國(guó)家發(fā)布實(shí)施了很多微生物方面的新標(biāo)準(zhǔn)。更新的這些標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)適用范圍、試劑和材料、檢測(cè)流程、附錄等均做出了部分刪增和修改，力爭(zhēng)使食品微生物學(xué)的檢驗(yàn)方法更加科學(xué)、合理、完善。其中有的標(biāo)準(zhǔn)增加了可選方法，如GB4789.30-2016《單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)》與2010版相比，增加了“第二法 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌平板計(jì)數(shù)法”和“第三法 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌MPN 計(jì)數(shù)法”，進(jìn)一步滿足了單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的計(jì)數(shù)要求，同時(shí)方法的可操作性大大提升，有利于基礎(chǔ)條件相對(duì)薄弱的實(shí)驗(yàn)室同樣能夠開展檢測(cè)；有的標(biāo)準(zhǔn)修改后則更加嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)，如GB4789.36—2016《大腸埃希氏菌0157H7NM檢驗(yàn)》，與2008版相比，刪除了“第二法 免疫磁珠捕獲法的原理”和“第三法 全自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫分析儀篩選法”以及“第四法 全自動(dòng)病原菌檢測(cè)系統(tǒng)篩選法”，這些方法都屬于備選方法，經(jīng)過多年試驗(yàn)證明其結(jié)果的準(zhǔn)確性仍存在一些不確定因素，同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備的要求也較高，因此不適宜作為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法。
