1.細菌保存于穿刺培養(yǎng)物中:一般細菌保存于穿刺培養(yǎng)物可以維持兩年。具體方法如下:用滅菌接種針挑取分散良好的單菌落,針緩慢穿過瓊脂到達瓶底,連續(xù)幾次,蓋上瓶蓋擰緊,做好標記。室溫下存放于暗處。(最好一點可以將瓶蓋放松,在適當溫度下培養(yǎng)過夜,再擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜,室溫或最好在4度避光保存)。
2.細菌保存于含有甘油的培養(yǎng)物中:
(1)在液體培養(yǎng)基中生長的細菌培養(yǎng)物:取0.85ml細菌培養(yǎng)物,加入0.15ml高壓滅菌甘油,振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻,然后轉移到標記好的保存管內,密封,在乙醇-干冰或液氮中凍結后再轉至-70度長期保存。在復蘇時,用滅菌接種針刮取凍結的培養(yǎng)物表面,然后立即把黏附于接種針上的細菌劃于含適當抗生素(antibiotic)的LB瓊脂平板表面,于37度過夜。
(2)在瓊脂平板上生長的細菌培養(yǎng)物:從瓊脂平板表面刮下細菌放入裝有2mlLB的無菌試管內,再加入等量的含有30%滅菌甘油的LB培養(yǎng)基,振蕩使甘油完全分布均勻后,分裝于無菌保存管內,密封,再按前述方法冰凍保存。這一方法的優(yōu)點在于可用于保存在質粒載體上建立的cDNA文庫。
2.細菌保存于含有甘油的培養(yǎng)物中:
(1)在液體培養(yǎng)基中生長的細菌培養(yǎng)物:取0.85ml細菌培養(yǎng)物,加入0.15ml高壓滅菌甘油,振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻,然后轉移到標記好的保存管內,密封,在乙醇-干冰或液氮中凍結后再轉至-70度長期保存。在復蘇時,用滅菌接種針刮取凍結的培養(yǎng)物表面,然后立即把黏附于接種針上的細菌劃于含適當抗生素(antibiotic)的LB瓊脂平板表面,于37度過夜。
(2)在瓊脂平板上生長的細菌培養(yǎng)物:從瓊脂平板表面刮下細菌放入裝有2mlLB的無菌試管內,再加入等量的含有30%滅菌甘油的LB培養(yǎng)基,振蕩使甘油完全分布均勻后,分裝于無菌保存管內,密封,再按前述方法冰凍保存。這一方法的優(yōu)點在于可用于保存在質粒載體上建立的cDNA文庫。