今天小編和大家一起來看看微生物能力驗證注意事項有哪些:
1、操作前仔細(xì)閱讀參指導(dǎo)書,關(guān)鍵是小的備注要注意,很多特殊情況的處理大都在備注里。
2、樣品接收前的檢查很重要,首先對樣品的完整性進(jìn)行檢查,對信息的閱讀要全面,如果發(fā)現(xiàn)樣品有問題及時溝通,這樣要比做樣品的時候在發(fā)現(xiàn)來的要及時,能節(jié)省不少的時間;
3、作業(yè)指導(dǎo)書的閱讀要到位,很多能力驗證樣品寄到后要跟一份作業(yè)指導(dǎo)書,作業(yè)指導(dǎo)書中往往會對本次能力驗證的樣品、成分、尺寸、選擇方法、樣品的結(jié)果記錄、包括修約或樣品的粘貼、樣品寄發(fā)的注意事項等有明確的規(guī)定,熟讀這些對試驗準(zhǔn)備有很好的作用。比如有的會要求將試驗后樣品一塊寄發(fā)組織單位,有的實驗室如果不仔細(xì)閱讀的話很容易將測試后樣品立即處理掉,如果寄樣時在看見可就完了。
4、測試前的準(zhǔn)備工作一定要做好,包括設(shè)備的校準(zhǔn)、試運(yùn)行等,有條件的情況下可以在正式測試前選擇一塊相仿的樣品進(jìn)行一下預(yù)測試,這樣會將測試過程中的問題提前發(fā)現(xiàn)提前解決。對正式測試的操作有幫助。
1、樣品測試過程中的判斷能力很重要,有時候我們在測試中往往會自以為是,為了保證測試過程中的準(zhǔn)確操作最好是找一個經(jīng)驗豐富的作督察,發(fā)現(xiàn)問題及時解決,如果等操作完畢再發(fā)現(xiàn)問題的話可能會因為樣品的消耗而無法驗證結(jié)果;
2、定量項目,西林瓶內(nèi)樣品不可分割,應(yīng)全部用于檢測。一般參考書指導(dǎo)的是加40mL稀釋液制成40mL樣品。
3、定量項目樣品稀釋。指導(dǎo)書標(biāo)明了稀釋范圍的,在稀釋范圍左右各加1個稀釋度進(jìn)行;書上沒有稀釋范圍的,多做稀釋倍數(shù),選擇合適的稀釋倍數(shù)計數(shù)(一般可稀釋至10-8)。
4、定量項目,除了要多做稀釋倍數(shù)外,同時同一稀釋度要多倒幾皿,從原理上來講,檢測過程屬于隨機(jī)抽樣檢查,平板越多,數(shù)據(jù)越接近真值?紤]性價比,又不可能一直瘋狂一個稀釋度很多平板,所以能力驗證時候多倒幾皿,求好結(jié)果。
5、定性項目有一些重要步驟:
a、增菌及分離步驟尤其重要。選擇合適的增菌液和分離用培養(yǎng)基對目標(biāo)菌的檢出非常關(guān)鍵,選擇兩種以上的增菌液和分離用培養(yǎng)基對菌株作直接分離和增菌后分離。
b、劃線分離十分重要,要把增菌液中的目標(biāo)菌盡量多的表達(dá)出來,要分出單個菌落并盡可能多挑取可疑菌落,確保分離到目標(biāo)菌。
c、生化試驗和血清學(xué)試驗以營養(yǎng)瓊脂平板上的純培養(yǎng)細(xì)菌為好。
陽性對照,是在試驗中,檢驗培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件是否適合,如果在實驗中,陽性實驗沒有生長的話,那這個實驗是失敗的。陰性對照主要是檢測培養(yǎng)基是否污染,在沒有加入任何東西培養(yǎng)時,培養(yǎng)基培養(yǎng)后還是會顯示陽性結(jié)果,這就說明培養(yǎng)基滅菌不徹底,染菌了,這樣也會影響實驗結(jié)果的。
1、培養(yǎng)基配制充分混勻后再滅菌
正確做法是用一部分水?dāng)嚢杈鶆蚝,再加入剩余水量,混勻后滅菌或分裝。
一定要用震蕩器充分混勻水化液,作為檢測原液,普通手搖混勻與經(jīng)震蕩器混勻的樣品液,計數(shù)結(jié)果相差較大。混勻后的樣品嚴(yán)格按照指導(dǎo)書規(guī)定的時間進(jìn)行檢驗。
2、混菌法倒皿要充分混勻
培養(yǎng)基倒完要左5圈右5圈(混勻速度一定要慢,目的是——避免培養(yǎng)基波動到二皿接觸的縫隙部分造成后續(xù)污染),找較水平位置冷卻凝固。
3、培養(yǎng)基要不要覆蓋問題
覆蓋的目的是為了阻止活菌在培養(yǎng)基表層通過鞭毛移動,造成片狀生長,無法計數(shù)這一不利現(xiàn)象的發(fā)生。這里可以發(fā)揮主觀能動性-對于不運(yùn)動的菌,可以不覆蓋,對于運(yùn)動的菌覆蓋。
總結(jié)一下
a.長期檢測同一種樣品,不覆蓋并無蔓延現(xiàn)象,不覆蓋;長期檢測蔓延選擇了覆蓋,一直覆蓋。
b.未知樣品,進(jìn)行覆蓋和不覆蓋的比對實驗,然后決定以后同樣的樣品是否需要覆蓋。養(yǎng)成經(jīng)驗。
c.能力驗證實驗,覆蓋和不覆蓋的都做,不要吝惜那么一點(diǎn)點(diǎn)培養(yǎng)基或耗材,畢竟能力驗證實驗做的漂亮才是實驗室(是室而不是人。┠芰Φ木C合體現(xiàn)。
4、 實驗培養(yǎng)過程勤觀察
微生物培養(yǎng)過程一般需要幾小時到幾十小時,要利用這段時間觀察培養(yǎng)箱及菌生長情況,比如溫度是否穩(wěn)定,培養(yǎng)室內(nèi)濕度如何等等,多思多看,準(zhǔn)備預(yù)案。方有可能得到與盲樣一致的實驗結(jié)果。
原始記錄應(yīng)有條理、思路清晰,完整準(zhǔn)確地記錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始記錄要包含檢測時間、檢測現(xiàn)象、檢測結(jié)果三個要素,方便檢測出現(xiàn)問題的溯源。
結(jié)果的判定一般根據(jù)設(shè)備操作,但是對于人為操作如評級、手工操作等結(jié)果可能會因為人員的差別而會有不同的偏差,這樣在判定時最好是找有經(jīng)驗的部門負(fù)責(zé)人或質(zhì)量專家一塊定奪,這樣的話會減少很多不必要的錯誤。