曾在第五屆PDA全球年會上,最終用戶、監(jiān)管機構(gòu)、制藥領(lǐng)域?qū)<引R聚一堂。Ed Tidswell博士曾對無法培養(yǎng)出的菌種(Viable but culturalbe,VBNC)的影響進行了討論。
他提出,在將近150萬種不同的微生物種群中,只有不到0.1%的微生物可以通過培養(yǎng)的方式獲得。他指出培養(yǎng)基罐裝、環(huán)境監(jiān)控和成品的無菌檢測并不能檢測出所有的微生物。因此,他建議,應(yīng)該采用快速的,不依賴于培養(yǎng)方式的微生物檢測方法
新技術(shù)的方法學(xué)驗證和實施
在會議上,來自各大企業(yè)的技術(shù)專家分別闡述了自己的觀點。
來自諾華制藥的Jennifer Gray展示了他們使用MilliporeMilliflex Rapid替代傳統(tǒng)方式進行無菌檢測,其原理是ATP生物熒光法。他們運用這個方式的動機是為了盡早地發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品的染菌風(fēng)險、降低產(chǎn)品放行周期并且也意在提高公司在快速微生物檢測方面的專業(yè)性。諾華花了5天時間驗證了22個菌種,7個來自ATCC,15個來自環(huán)境取樣。FDA批準(zhǔn)了對比試驗的方案,EMA在2010年2月份,MHRA在2010年5月份也都批準(zhǔn)了他們的方案。
來自輝瑞制藥的Amelia Tait Kamradt, 討論了他們使用PALL公司New GeneDisc System的情況。他們在一些方面做了很多的研究,比如專屬性、檢查限、耐用性等。
來自默克的Geert Verdonk博士分享了他使用Charles River實驗室公司的endosafe進行的驗證工作。他在默克快速微生物檢測項目中使用該公司的便攜式內(nèi)毒素產(chǎn)品,并進行了很多驗證實驗。
來自Accugenix公司的Sara Polson提出他們使用的飛行時間---次級離子質(zhì)譜分析法(TOF MS)微生物識別系統(tǒng),可以電離微生物細胞,從而可以把微粒按照尺寸和電荷分開。這種特異性可以用于對微生物種類的識別。
其實類似的應(yīng)用很多,而在國際知名企業(yè)中尤為顯著,這主要基于這些公司對技術(shù)變革的渴望,尤其是對新技術(shù)將給他們的生產(chǎn)和產(chǎn)品帶來的收益。制藥行業(yè)是一個即保守又激進的行業(yè)。它的保守在于,任何改變都是會付出代價的,尤其是跟人類息息相關(guān)的健康掛鉤,任何沒有原則或者不慎重的改變往往會導(dǎo)致災(zāi)難。同時他又是激進的,因為它出來科技發(fā)展的前沿,沐浴在科技日新月異進步,各種技術(shù)壁壘不斷被攻克的氛圍之中,創(chuàng)新和開發(fā)是這個行業(yè)的靈魂之一。
各國藥典委員會對RMMs提出的愿景
美國藥典委員會專家James Aker博士指出,所有美國藥典上所羅列的參考方式都適用于幾乎所有類型的產(chǎn)品。而且新的方法想要收錄到藥典中的話,必須不能具有專利保護且來源單一,還要清晰的區(qū)分是用于放行標(biāo)準(zhǔn)還是過程檢測。因此,如果有企業(yè)想要提交一種新型的快速檢測方式,并且意在將其收錄在藥典中的話,必須要考慮到上述的這些面。USP1223撰寫的目的就是為了給企業(yè)提供關(guān)于替代檢測方法的驗證指南,而RMMs也應(yīng)該算作是微生物檢測的替代方法。事實上,USP62早已明確了RMMs和替代方法可以使用,只要經(jīng)過合理的驗證。
歐盟藥典委員會的Han van Doorne博士指出,歐盟藥典的相應(yīng)章節(jié)也規(guī)定,只要證明替代方式和現(xiàn)有方式的等效性,那么前者是可以使用的。章節(jié)2.6.27寫道,自動化系統(tǒng)通常被應(yīng)用于細胞類制品,例如對于無菌水平的日常監(jiān)控。章節(jié)2.6.7提到,使用核酸技術(shù)來檢測支原體。這些都是已經(jīng)被收入到藥典中的新的檢測手段。章節(jié)5.1.6則推出了對于可替代微生物檢測方法的驗證。之后Han van Doorne博士提出今后會對章節(jié)5.1.6進行修訂,他們打算增加更多關(guān)于過程分析技術(shù)(PAT)的內(nèi)容,用以明確的區(qū)分檢測、分離、辨別之間的不同。不過,這將不會出現(xiàn)在之后修正版本中,而是以白皮書的形式出現(xiàn)在歐盟藥典里,這個章節(jié)將會加入基于DNA技術(shù)的方法。最后他分析了來自于工業(yè)用戶的調(diào)查結(jié)果,這個調(diào)查來自于制藥用戶對之后的修訂章節(jié)的期望,這些期望包括了,什么樣的應(yīng)用已經(jīng)批準(zhǔn)可以使用RMMs,是否只能將RMMs用于實驗而非放行,能否披露更多驗證方面等諸多內(nèi)容。
日本藥典委員會的Tsuguo Sasaki博士表示,目前已經(jīng)有2個新的關(guān)于RMMs章節(jié)收錄到日本藥典中。其中包括章節(jié)22(基于分子生物學(xué)的方法來快速鑒別微生物),章節(jié)33(基于熒光染色方法對細胞進行快速計數(shù))。之后他又列舉了一些例子,說的是RMMs驗證與藥典要求不在同一層面。例如,有一家滴眼液企業(yè)提交了一份快速檢測驗證方案,使用ATP生物發(fā)光技術(shù)縮短無菌檢測時間,從2周縮短到1周,他們是用大豆酪蛋白培養(yǎng)基來代替之前的培養(yǎng)基,之前的培養(yǎng)基可以修復(fù)更多受損細胞。基于這個原因,這個申請沒有被批準(zhǔn),Sasaki博士之后又展示了相關(guān)數(shù)據(jù),一些菌落可以在R2A培養(yǎng)基上生長,而TSA培養(yǎng)基則不行。因此,這家公司應(yīng)該重新去研究并且選擇更合適的培養(yǎng)基。
各國監(jiān)管部門提供對驗證和應(yīng)用的指導(dǎo)和期望
澳大利亞藥品管理局的Vivian Christ提出,他們先后修訂了關(guān)于RMMs的相關(guān)條款,澳洲相關(guān)法規(guī)與歐盟和英國藥典上的相關(guān)規(guī)定大致相同,他們同時還參照了USP1223,Ph Eur 5.1.6和PDA 33號技術(shù)報告以及ISO17025(對于非標(biāo)方法的驗證)。從立法的角度來看,他們還轉(zhuǎn)向了GMP法規(guī),也就是說,接受其他的方法的一個條件是要符合GMP的規(guī)定,例如附錄11(計算機驗證)和附錄15(IQ、OQ、PQ)。然而不同于其他監(jiān)管機構(gòu),澳洲管理局只是默認了新的技術(shù),而沒有公開出臺相應(yīng)的聲明和政策。
FDA的David Hussong博士說RMMs技術(shù)正是因為順應(yīng)了質(zhì)量源于設(shè)計(QbD)的理念而顯得非常重要。他們鼓勵使用新的技術(shù)并且會推進相關(guān)的立法進程。對于QbD,對于生產(chǎn)過程中的分析是需要的,應(yīng)該持續(xù)進行改進,從而檢驗設(shè)計環(huán)節(jié)是否合理并且對比工藝過程中的改進進行分析。Rajesh Gupta博士討論了RMMs被用于作為替代的微生物檢測方式,從企業(yè)的角度來看,這可以針對過程中出現(xiàn)的問題提供更快的解決方案,一些生物制品的有效期很短(有的甚至只有14天,這幾乎是整個無菌檢測的時間)而且產(chǎn)量也很少,一般用于緊急使用,對于這類產(chǎn)品,其意義就尤為重要。所以考慮RMMs的時候也要考慮不用產(chǎn)品的不同情況。
最后,Tsuguo Sasaki博士提供了一些在日本RMMs使用的看法。日本監(jiān)管部門將和企業(yè)合作去發(fā)展RMMs在日本的政策。在大多數(shù)情況下,受損微生物是無法檢測的,如純化水系統(tǒng)。因此,快速連續(xù)監(jiān)測技術(shù)在制藥用水環(huán)節(jié)是非常需要的,除去技術(shù)之外,日本將會采用與美國相類似的RMM驗證提交模式。
總結(jié)
正如大家所看到的那樣,對于RMMs的關(guān)注,從最終用戶到監(jiān)管機構(gòu)都已經(jīng)到達了非常高的水平,實際的發(fā)展勢頭也很猛。我們無需始終沉浸在19世紀(jì)技術(shù)的影響中,F(xiàn)在是提出變革和創(chuàng)新的時候,所以大家應(yīng)該致力于對RMMs和新方法的探索和研究,以讓我們的檢測手段與目前飛速發(fā)展的工業(yè)進程相一致。