食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號(hào)

大腸菌群檢測MPN法與平板計(jì)數(shù)法比較!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2021-01-11
核心提示:GB4789.3-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》中規(guī)定了大腸菌群計(jì)數(shù)的MPN法與平板計(jì)數(shù)法,那這兩種方法怎么
 GB4789.3-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》中規(guī)定了大腸菌群計(jì)數(shù)的MPN法與平板計(jì)數(shù)法,那這兩種方法怎么選擇以及有什么區(qū)別呢?今天小編就跟大家普及一下~
圖片

二者范圍不同:

GB4789.3-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》范圍中規(guī)定:“本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于大腸菌群含量較低的食品中大腸菌群的計(jì)數(shù);第二法適用于大腸菌群含量較高的食品中大腸菌群的計(jì)數(shù)。”這里所說的含量高低通常以100CFU為準(zhǔn),即含量低于100CFU采用MPN法,含量高于100CFU采用CFU法。


概念不同:

•MPN(most probable number)法:即最近似數(shù)法,也稱為最可能數(shù)法,是食品檢驗(yàn)中常用的方法。1915年,McCrady首次發(fā)表了用MPN法(最大可能數(shù)法) 來估算細(xì)菌濃度的方法, 這是一種應(yīng)用概率理論來估算細(xì)菌濃度的方法。


•平板計(jì)數(shù)法 (colony forming units):CFU即菌落形成單位,樣品經(jīng)過處理培養(yǎng)后我們數(shù)出平板上所生長出的菌落個(gè)數(shù),從而計(jì)算出每毫升或每克待檢樣品中可以培養(yǎng)出多少個(gè)菌落,以CFU/mL或CFU/g報(bào)告之。


•濾膜法(membrane filter method):將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中,經(jīng)過抽濾,細(xì)菌被截留在濾膜上,將濾膜貼于培養(yǎng)基上,經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)數(shù)和鑒定濾膜上生長的菌落,依據(jù)過濾水樣計(jì)算每升或每100毫升水樣中的菌落總數(shù)。

•菌落:是指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長繁殖而形成的能被肉眼識(shí)別的生長物,它是由數(shù)以萬計(jì)相同的細(xì)菌集合而成。

原理不同:
•MPN法:利用待測微生物的特殊生理功能的選擇性來擺脫其他微生物類群的干擾,并通過該生理功能的表現(xiàn)來判斷該類群微生物的存在和豐度。因?yàn)榧?xì)菌在樣本內(nèi)的分布是隨機(jī)的,所以檢測細(xì)菌時(shí),可應(yīng)用概率理論計(jì)算菌數(shù),實(shí)驗(yàn)結(jié)果以MPN值表示,但MPN值并不能表示實(shí)際菌落數(shù), 實(shí)際菌落數(shù)有可能落在置信區(qū)間內(nèi)的任何一點(diǎn),MPN值是落在這個(gè)置信區(qū)間內(nèi)概率最大的一點(diǎn)。
舉例說:稀釋度為 0.01,0.001,0.0001所對(duì)應(yīng)的陽性管數(shù)分別為 2-0-0 ;
查MPN檢索表可知:
MPN值為92 CFU/mL(g), 當(dāng)置信度為95%,則其下限和上限分別為14,380,即對(duì)應(yīng)的菌落濃度區(qū)間為14~380 CFU/mL(g),意思是:這個(gè)檢驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)菌濃度落在14-380 CFU/mL(g)區(qū)間均有可能,只不過92 CFU/mL(g)出現(xiàn)的概率最大,概率為31.9%. 

平板計(jì)數(shù)法:平板菌落計(jì)數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的現(xiàn)象進(jìn)行的,也就是說一個(gè)菌落即代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí),先將待測樣品作一系列稀釋,樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后,其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞,取一定量的稀釋液接種到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落,即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。


濾膜法:在壓力差的作用下,懸浮液中的液體(或氣體)透過可滲性介質(zhì)(過濾介質(zhì)),直徑大于網(wǎng)孔直徑的菌體為介質(zhì)所截留,從而實(shí)現(xiàn)樣品和菌體的分離。然后將濾膜放在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),菌體可直接在膜上生長,從而可直接計(jì)數(shù)。

 

MPN優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn):操作簡便、靈敏度較高,時(shí)間短,可直接觀察試管得出結(jié)論,每個(gè)接種稀釋度均有重復(fù),重復(fù)次數(shù)越多,誤差就會(huì)越小。

 

缺點(diǎn):要求樣品具有均一性,適合檢驗(yàn)液體樣品,且只能用于檢驗(yàn)在發(fā)酵培養(yǎng)基中產(chǎn)氣的菌種。

 

注意事項(xiàng):需選擇合適的稀釋度和接種量。

 

平板計(jì)數(shù)法優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn):

1、能測出樣品中的活菌數(shù),直觀,能夠直接讀數(shù)

2、平板菌落計(jì)數(shù)法通常做梯度稀釋,所以計(jì)數(shù)的線性范圍大。

3、由于是菌懸液傾注或涂布,所以比較均勻,能較好的反應(yīng)菌落的疏密程度。

4、靈敏,平行性較好。

 

缺點(diǎn):

1、手續(xù)較繁,而且測定值常受各種因素的影響。

2、厭氧或微需氧菌、有特殊營養(yǎng)要求的以及非嗜中溫的細(xì)菌,比較難檢測出。

3、菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細(xì)菌的種類,所以有時(shí)被稱為雜菌數(shù),需氧菌數(shù)等。

4、長成的一個(gè)單菌落也可能來自樣品中的2~3或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。

5、檢驗(yàn)時(shí)間長。


注意事項(xiàng):

樣品需要充分均勻以及選擇合適稀釋度和接種量,檢驗(yàn)過程必須嚴(yán)格無菌,以防污染雜菌。

濾膜法優(yōu)缺點(diǎn)  

優(yōu)點(diǎn):
1、可以檢測大量的樣品。
2、濃縮效應(yīng)使微生物檢測的準(zhǔn)確度提高。
3、帶有菌落的濾膜,可作為檢測的永久記錄存檔。
4、可見的菌落和樣品量直接對(duì)應(yīng),得出定量結(jié)果。

缺點(diǎn):
1、成本高。
2、操作要求高。

注意事項(xiàng):

對(duì)樣品的流動(dòng)性要求比較高,并且含菌量不能太高。

分類以及操作方法

MPN法:根據(jù)需要以及檢驗(yàn)的精度不一樣可使用9管法以及15管法;其中9管法通常用作食品檢驗(yàn),而15管法用在飲用水的檢驗(yàn)(15管法的精度要高些);基本操作:樣品梯度稀釋——接種——培養(yǎng)——觀察結(jié)果——查表報(bào)告。

 

平板計(jì)數(shù)法:有平板傾注法,一般檢驗(yàn)使用的方法;平板涂布法,用于細(xì)菌含量比較高,并且要求知道細(xì)菌菌落形態(tài)(只計(jì)數(shù)特定細(xì)菌);以及濾膜法,檢測特定種類菌常用方法,應(yīng)用越來越廣泛;基本操作一般包括:樣品的稀釋--傾注平皿--培養(yǎng)48小時(shí)--計(jì)數(shù)報(bào)告。(濾膜法是:樣品——過濾——貼濾膜——培養(yǎng)——計(jì)數(shù)報(bào)告。)

 

適用性

MPN法:適用于具有特殊生理功能的微生物類群或者檢測帶有大量競爭菌的食品及其原料和未經(jīng)處理的含少量金黃色葡萄球菌的食品(土壤、污水、牛奶等)。

 

平板計(jì)數(shù)法:應(yīng)用廣泛,是檢驗(yàn)、菌種分離、純化等用得最多的方法(固體、液體樣品均可)。

 

濾膜法:主要應(yīng)用于潔凈度較高的樣品,并且樣品的流動(dòng)性決定了可操作性。

 

衛(wèi)生學(xué)意義

兩者都是檢測的活菌數(shù),MPN是通過極大近似值然后估計(jì),求出分布函數(shù)中的參數(shù)、置信區(qū)間,再估計(jì);但是CFU通過數(shù)據(jù)直接求數(shù)學(xué)期望,平均值和方差。

 

測定結(jié)果判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量,一定程度反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求,以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)。多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。

編輯:songjiajie2010

 
分享:
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗(yàn)技術(shù)
點(diǎn)擊排行
檢驗(yàn)技術(shù)
 
 
Processed in 0.183 second(s), 17 queries, Memory 0.96 M