大腸菌群是食品污染程度的重要參數(shù)指標(biāo),是反應(yīng)食品質(zhì)量的必測(cè)項(xiàng)目,因此,很好地掌握其檢測(cè)方法以及在檢測(cè)全過程中的常見問題及解決辦法是每一個(gè)食品檢測(cè)人都應(yīng)該具備的技能。
在大腸菌群平板法檢測(cè)過程中,你是不是經(jīng)常有這樣或者那樣的疑問呢?比如這個(gè)菌落是典型的嗎?如何確認(rèn)驗(yàn)證?......
小編今天分享這篇文章,針對(duì)我們檢測(cè)過程常見的問題,全都給出了答案,接下來我們一起look,look!
一、VRBA培養(yǎng)相關(guān)問題
1.所用器皿是否需要滅菌?
答:不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌,但要求一定要清洗干凈,表面無污漬、無殘留。煮沸完成后,取下錐形瓶,用一般常用的衛(wèi)生紙(軟紙)覆蓋瓶口,用橡皮筋纏繞,待冷卻至適宜溫度即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時(shí),須點(diǎn)燃酒精燈,稍微灼燒錐形瓶口。
2.如何保持“煮沸2min”?
答:可以用電磁爐或電熱板進(jìn)行加熱煮沸,在該培養(yǎng)基即將煮沸時(shí)調(diào)低溫度。實(shí)際操作時(shí),不需要嚴(yán)格按照此要求進(jìn)行,加熱煮沸數(shù)秒即可。原因:本培養(yǎng)基很難保持煮沸2min,一旦煮沸,則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰,若不調(diào)低溫度或立刻采取其他措施,則培養(yǎng)基可在數(shù)秒內(nèi)噴涌出來,嚴(yán)重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍(實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)因子之一)。
3.若培養(yǎng)基未用完,是否可以冷藏起來下次用?
答:不可以。4789.28中已規(guī)定,固體培養(yǎng)基最多允許熔融1次(指的是經(jīng)過高壓滅菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用)。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后,再次熔融時(shí)非常容易噴涌,若溫度控制不當(dāng),底部培養(yǎng)基熔融后很快就會(huì)發(fā)生噴涌(即培養(yǎng)基未完全熔融就會(huì)發(fā)生噴涌現(xiàn)象)。
4.傾注完成后是否需要“覆蓋一層”?如何覆蓋?
答:一般情況下不需要覆蓋。在實(shí)際操作過程中,若檢驗(yàn)員初次接觸該食品(或食品品類),則有必要在傾注培養(yǎng)基后再覆蓋一層(原因是不清楚該樣品是否會(huì)發(fā)生蔓延)。而如此往復(fù)測(cè)試幾次后,若該樣品或食品品類均不存在蔓延現(xiàn)象,則以后的實(shí)驗(yàn)中都不需要進(jìn)行覆蓋。若重復(fù)多次測(cè)試后都有蔓延現(xiàn)象,則以后的檢驗(yàn)中最好都進(jìn)行覆蓋,最好是在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固(不會(huì)發(fā)生晃動(dòng))時(shí)再傾注一層培養(yǎng)基(“一層”是指緩慢傾注培養(yǎng)基至培養(yǎng)基剛好能夠覆蓋整個(gè)平皿)。
二、如何確定培養(yǎng)基上長(zhǎng)的是不是大腸菌群?
答:不要去管什么是大腸菌群的典型形態(tài),建議新手們認(rèn)真按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),此證實(shí)試驗(yàn)非常簡(jiǎn)單,每一次VRBA上有菌落生長(zhǎng)都進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),如此往復(fù)3-4次,對(duì)于哪種形態(tài)才是大腸菌群已經(jīng)能夠了然于心了。建議平時(shí)多配一些BGLB肉湯管冷藏儲(chǔ)存?zhèn)溆,需要進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)時(shí)分分鐘可以完成試驗(yàn)(BGLB肉湯管一般可儲(chǔ)存2-3個(gè)月,建議配制10-20管左右,不要配制太多,證實(shí)試驗(yàn)很少做)。
三、兩個(gè)梯度都長(zhǎng)了菌,如何選取?
答:選取15-150CFU之間的平板(指的是VRBA平板上所有菌落數(shù)在此范圍),挑取可疑菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)。詳細(xì)舉例說明:若有兩個(gè)連續(xù)梯度的4個(gè)平板上菌落數(shù)均在15-150之間,則4個(gè)平板上的菌落都要挑取進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),實(shí)際操作時(shí),可靈活操作,如:1:10的兩個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為120、123,1:100的兩個(gè)平板的菌落數(shù)分別為16、18,嚴(yán)格來講必須至少在每個(gè)平板上分別挑取5個(gè)可疑菌落、5個(gè)典型菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),如此需要40根BGLB肉湯管。建議使用鎳合金接種環(huán)(即傳統(tǒng)的接種環(huán),而不是一次性塑料接種環(huán)),因?yàn)閂RBA上生長(zhǎng)的菌落(無論典型或可疑)大部分長(zhǎng)在底層、且菌落一般較大,被培養(yǎng)基覆蓋,傳統(tǒng)的接種環(huán)較細(xì),用以刮去上層培養(yǎng)基較方便,挑取菌落也較方便。
四、如何進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)?菌落選取數(shù)量?
答:同上所述,建議新手們VRBA上的所有不同形態(tài)的菌落都進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)。每種不同形態(tài)都挑取5個(gè)進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)(若BGLB管足夠,建議多挑取幾個(gè)進(jìn)行試驗(yàn))。
注意:A.每種可疑菌落挑取5個(gè),每個(gè)菌落放入1管GBLB管中;B.“產(chǎn)氣者,記為大腸菌群陽性管”,就要求在實(shí)驗(yàn)前須認(rèn)真篩選BGLB管,凡產(chǎn)氣的GBLB管應(yīng)棄去不用。
五、結(jié)果如何計(jì)算?
答:首先,在VRBA培養(yǎng)24h后進(jìn)行計(jì)數(shù),分別計(jì)數(shù)可疑大腸菌群和典型大腸菌群(何為可疑、何為典型?同“2”,檢驗(yàn)員多進(jìn)行幾次實(shí)驗(yàn)后自然很清楚典型的大腸菌群是何種形態(tài))的數(shù)量。假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個(gè),典型大腸菌群有6個(gè);證實(shí)實(shí)驗(yàn)應(yīng)該按照可疑跟典型5:3的比例進(jìn)行挑選。
例:10-4樣品稀釋液1mL,在VRBA平板上有100個(gè)典型和可疑菌落,挑取其中10個(gè)接種BGLB肉湯管,證實(shí)有6個(gè)陽性管,則該樣品的大腸菌群數(shù)為:100*6/10*104/g(mL)=6.0*105CFU/g(mL)。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長(zhǎng),則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。
六、若平板上很多菌落,最終證實(shí)全部為陰性,結(jié)果如何計(jì)算?
答:首先是證明提問者沒有認(rèn)真看標(biāo)準(zhǔn)。“很多”是多少?是否在15—150范圍內(nèi)?是哪一個(gè)稀釋度?根據(jù)第3條,選取適宜菌落數(shù)的平板挑取菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若證實(shí)全部為陰性,則需要再挑取更低稀釋度的平板上的菌落(建議可疑和典型菌落分別挑取10個(gè))進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若第二次證實(shí)試驗(yàn)均呈陰性,以<1乘以最低稀釋度進(jìn)行計(jì)算,如:1:10的平板菌落數(shù)分別為120、123,1:100的平板上菌落數(shù)分別為16、18,首先挑取1:100的兩個(gè)平板上的菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若全部為陰性,再挑取1:10的兩個(gè)平板上的菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若1:10的平板上的菌落數(shù)證實(shí)為陰性,則最終計(jì)算過程為<1x10,最終結(jié)果為<10;若1:10的的平板上的菌落有陽性管,則按照第5條進(jìn)行計(jì)算。
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