食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號

微生物培養(yǎng)基之效能檢查

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-03-10
核心提示:培養(yǎng)基效能檢查在例行的微生物檢查工作中占據(jù)了不少的時間與人力,尤以培養(yǎng)基使用量比較多的環(huán)控、限量與無菌性試驗為最,而且使
 培養(yǎng)基效能檢查在例行的微生物檢查工作中占據(jù)了不少的時間與人力,尤以培養(yǎng)基使用量比較多的環(huán)控、限量與無菌性試驗為最,而且使用菌株種類也較多。本篇就藥品微生物培養(yǎng)基之效能檢查進行分析討論,從培養(yǎng)基的效能三種評估面向,分別為生長能力(growth promotion)、抑制能力(inhibition)與指示能力(indicative),進行分析討論。

說明

    生長能力的檢查是指采用低菌量的特定菌種挑戰(zhàn)培養(yǎng)基的菌落回收率,一般而言所謂低菌量是指至少<100 CFU,而所謂特定菌種是指藥典規(guī)定的標準菌株、控制菌以及不合宜微生物(objectionable)。無論滋養(yǎng)性培養(yǎng)基(例如TSA)或是選擇性培養(yǎng)基(例如麥康凱瓊脂,MacConkey agar)都需要執(zhí)行生長能力的檢查,然而對于選擇性培養(yǎng)基來說,由于目標菌的回收率常常低于滋養(yǎng)性培養(yǎng)基,因此國際藥典并未針對選擇性培養(yǎng)基的回收率有明確的要求(非強制>50%),但是對于選擇性培養(yǎng)基的抑制能力與指示能力則有特別要求。操作這三種培養(yǎng)基效能檢查時,必須注意到接種菌株種類、培養(yǎng)與觀察時間的要求是不同的。舉例來說,生長能力的檢查必需在藥典規(guī)定的最低時間內(nèi)完成培養(yǎng);抑制能力的培養(yǎng)時間則不低于藥典規(guī)范的最長時間培養(yǎng);抑制能力須接種>100 CFU(常用的濃度為1,000 CFU左右)的非目標菌株用以挑戰(zhàn)其抑制力。


 菌株的選擇 1 (在限度檢查與環(huán)控方面)

 

    一般來說,微生物限度檢查與環(huán)境監(jiān)控培養(yǎng)基通常使用TSA與SDA平板,至少需要5株藥典菌株,而無菌性試驗則需要6到7種菌株(方法合適性采用大腸桿菌)。然而,除了藥典規(guī)范的菌株以外,無菌性檢查用的培養(yǎng)基最好能夠再增加廠內(nèi)分離菌株加以挑戰(zhàn)。最佳的選擇可以是過去曾經(jīng)造成無菌性試驗失敗的污染菌株,或是曾經(jīng)在該環(huán)境(通常為A、B級區(qū))所分離的菌株。特別要注意的是,若細胞制劑/治療產(chǎn)品采用了替代無菌性試驗方法,例如Bact/Alert血培養(yǎng)設(shè)備,在歐洲藥典EP 2.6.27的規(guī)定中,部分菌株與傳統(tǒng)無菌性試驗不同,例如新增了在臨床常見的厭氧感染菌Bacteroides fragilis ATCC 25285;對于環(huán)境監(jiān)控用培養(yǎng)基,雖然藥典并未強制規(guī)范挑戰(zhàn)菌株為何,但一般來說都是以微生物限量檢查常見的五種菌株來檢查(金葡、銅綠、枯草、黑曲霉與白念),然而基于環(huán)境中常態(tài)菌叢通常為非藥典建議QC菌株,例如微球菌(Micrococcus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、棒狀桿菌(Corynebacterium)甚至霉菌及酵母菌等,且基于對消毒劑效能的考慮,建議至少增加2至3種非藥典所建議的廠房環(huán)境菌株加以挑戰(zhàn)培養(yǎng)基效能。若是廠內(nèi)已經(jīng)建立有不合宜微生物名單(objactionable organism list),或是發(fā)現(xiàn)了不適當?shù)木N(例如霉菌、革蘭氏陰性桿菌等)都可以采用作為環(huán)境監(jiān)控用培養(yǎng)基的效能檢查用菌種。


菌株的選擇 2 (在水質(zhì)檢查與無菌性試驗方面)

    對于制藥用水的檢查方式,歐美各國對于培養(yǎng)基的選擇各有不同的評論。但目前比較多藥廠采用的還是R2A與PCA兩種培養(yǎng)基,部分藥廠對于源水質(zhì)量的檢查還會增加使用mEndo agar或是顯色培養(yǎng)基(chromogenic agar)來評估其革蘭氏陰性桿菌。由于存在于水中的微生物通常處于營養(yǎng)缺乏(starvation)或是高壓力(stressed)狀態(tài),菌種生長較為緩慢,菌落不明顯,所以培養(yǎng)條件有些許不同,例如某些藥廠采用營養(yǎng)較低的R2A培養(yǎng)基低溫培養(yǎng)4-7天,而不是選擇常用的TSA或是PCA培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。挑戰(zhàn)用于制藥等級水檢查用培養(yǎng)基的菌種,考慮的因子會跟微生物特性有很大的關(guān)系。容易形成生物膜(Biofilm)的假單胞菌(Pseudomonas)、甲基桿菌(Methylobacterium)、羅爾斯頓氏菌(Ralstonia)、寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas)應(yīng)該被列為培養(yǎng)基檢查的菌株,例如日本藥典建議使用甲基桿菌與假單孢菌;革蘭氏陽性菌通常不是水中微生物的主角,它們不耐存活于液態(tài)環(huán)境,但是帶有內(nèi)孢子的革蘭氏陽性芽孢菌,由于能夠耐熱與UV照射,所以也可以作為培養(yǎng)基挑戰(zhàn)之用,例如歐洲藥典對于R2A的建議是使用枯草桿菌來挑戰(zhàn);不形成生物膜的革蘭氏陰性菌且"非"假單孢菌屬,例如大腸桿菌群,雖然這些細菌大部份會在水系統(tǒng)的處理過程被去除(或是無法存活),但這些腸桿菌科成員卻是源水潔凈程度的重要指標。然而,藥典并沒有建議使用何種培養(yǎng)基來檢查這類微生物。或許常用于環(huán)檢規(guī)范的mEndo agar或是顯色培養(yǎng)基或食品檢驗的VRBGA可以列為參考,一來這些培養(yǎng)基有標準方法可以依循,二來這些培養(yǎng)基也已經(jīng)有質(zhì)量管理規(guī)范,例如美國APHA公共衛(wèi)生協(xié)會。


菌株的選擇 3 (在控制菌用培養(yǎng)基效能方面)

    控制菌的檢查需要使用到許多選擇性培養(yǎng)基,例如麥康凱培養(yǎng)基(MacConkey agar/broth)、RV沙門增菌液體培養(yǎng)基(RV broth)、溴化十六烷基三甲銨瓊脂(cetrimide agar)等等。由于這些培養(yǎng)基可能同時具備有目標菌生長能力、非目標菌抑制能力,甚至具備有指示能力,所以其成份組成通常較為復(fù)雜,配制較為繁瑣,在效能檢查上也更為復(fù)雜。以甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基(Mannitol salt agar)為例,需要使用金黃色葡萄球菌來挑戰(zhàn)其生長與指示能力,用大腸桿菌挑戰(zhàn)該培養(yǎng)基的抑制能力。

總結(jié)

    生長能力的檢查必需在藥典規(guī)定的最低時間內(nèi)完成培養(yǎng)(<18小時);抑制能力則須接種>100 CFU的非目標菌株且不低于藥典規(guī)范的最長時間培養(yǎng)(>72小時)。值得注意的是,2015年版中華人民共和國藥典對于指示能力的培養(yǎng)時間與其他國際藥典不同,國際藥典,例如USP是規(guī)定指示能力的培養(yǎng)時間可以在藥典的規(guī)定時間以內(nèi)(18-72小時),但2015年版中華人民共和國藥典則是更嚴格要求低于18小時需觀察得到(黃色菌落與黃色圈環(huán))。對于液態(tài)增菌培養(yǎng)夜,例如TSB、MacConkey broth、RV broth對指示能力則沒有明確要求。除了目前2015年版中華人民共和國藥典所規(guī)范的七類控制菌檢查以外,對于伯克氏菌(Burkholderia)以及其他不合宜微生物(objectionable)檢查用的培養(yǎng)基,也應(yīng)建立一套培養(yǎng)基效能檢查以及方法合適性檢查的方法。

編輯:songjiajie2010

 
分享:
[ 網(wǎng)刊訂閱 ]  [ 檢驗技術(shù)搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關(guān)閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗技術(shù)
點擊排行
檢驗技術(shù)
 
 
Processed in 0.024 second(s), 14 queries, Memory 0.94 M