第一次劃線及每次劃線之前都要灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的總結(jié)如下表：

1、將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅;2、在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞;

3、將試管口通過火焰;4、將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液;

4、將試管口通過火焰，并塞上棉塞;6、左手將皿蓋打開條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。

7、灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一-區(qū)域的劃線與第一-區(qū)相連。8、將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.稀釋操作時(shí)：

每支試管及其中9mL水、移液管均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1－2cm處。

2.涂布平板時(shí)：

①涂布器用70％酒精消毒，取出時(shí)，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。

②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。

③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管頭不要接觸任何物體。