干熱滅菌和濕熱滅菌是微生物實驗室日常工作操作中最重要也是最常用的滅菌手段。
濕熱滅菌以高壓蒸汽滅菌和煮沸滅菌等為主,前者的原理是直接用蒸汽滅菌,蒸汽具有的大量的熱量和強大的穿透力,破壞菌體蛋白和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡。
絕大部分的培養(yǎng)基的滅菌方式是濕熱滅菌——121℃15min,少量培養(yǎng)基如沙門SC等只能煮沸滅菌。對于設(shè)備和器具來說,如果進行濕熱滅菌,應(yīng)該采用121oC20min,適用于玻璃器皿、移液器槍頭、塑料瓶等。按照GB 15981的規(guī)定,評價滅菌效果。
那么為什么培養(yǎng)基的常規(guī)工藝定為121℃15min?
培養(yǎng)基的滅菌主要有兩個目的,一是盡可能的殺死全部雜菌及其芽孢,二是最大限度的保留培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分。
濕熱滅菌條件的選擇應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力、微生物污染程度等因素,但無論采用何種滅菌時間和溫度參數(shù),都必須證明所采用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在日常運行過程中能確保滅菌后的SAL<=10-6。
SAL指滅菌處理后單位產(chǎn)品上存在活微生物的概率,通常表示為10-n。如,設(shè)定SAL為10-6,即經(jīng)滅菌處理后在一百萬件物品中最多只允許有一件物品存在活微生物此時間已經(jīng)是過度滅殺。
干熱滅菌以電熱鼓風(fēng)干燥箱和火焰灼燒為主,其滅菌原理是利用高溫對微生物有氧化、蛋白質(zhì)變性和電解質(zhì)濃縮作用來滅殺微生物。
采用干燥箱滅菌。160oC滅菌2h, 180℃滅菌1h,適用于玻璃器皿,不銹鋼器具等。
干熱過度滅殺后產(chǎn)品的SAL<10-12,此時物品一般無需再進行滅菌微生物的測定。