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副溶血性弧菌的定性與定量檢測

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-04-19
核心提示:定性檢測將制備的1:10樣品勻液于36℃1℃培養(yǎng)8 h~18 h定量檢測用無菌吸管吸取1:10樣品勻液1 mL,注入含有9 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨
 

定性檢測

 

將制備的1:10樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)8 h~18 h

 


定量檢測

用無菌吸管吸取1:10樣品勻液1 mL,注入含有9 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi),振搖 試管混勻,制備1:100的樣品勻液。

另取1 mL無菌吸管,按5.2.2.1操作程序,依次制備10倍系列稀釋樣品勻液,每遞增稀釋一次,換用一支1 mL無菌吸管。

根據(jù)對檢樣污染情況的估計,選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度,每個稀釋度接種3支含有9 mL 3% 氯化鈉堿性蛋白胨水的試管,每管接種1 mL置36℃±1℃恒溫箱內(nèi),培養(yǎng)8 h〜18 h

 

分離

 

對所有顯示生長的增菌液,用接種環(huán)在距離液面以下1 cm內(nèi)沾取一環(huán)增菌液,于TCBS平板或 弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。一支試管劃線一塊平板。于36±1℃培養(yǎng)18 h〜24 h

典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落,用接種環(huán)輕觸,有類似 口香糖的質(zhì)感,直徑2 mm〜3 mm。從培養(yǎng)箱取出TCBS平板后,應(yīng)盡快(不超過1 h)挑取菌落或標(biāo)記 要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養(yǎng)基上的特征按照產(chǎn)品說明進(jìn)行判定。

 

純培養(yǎng)

挑取3個或以上可疑菌落,劃線接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板,36℃±1℃培養(yǎng)18 h〜24h

氧化酶試驗:挑選純培養(yǎng)的單個菌落進(jìn)行氧化酶試驗,副溶血性弧菌為氧化酶陽性。

涂片鏡檢:將可疑菌落涂片,進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢觀察形態(tài)。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性,呈

棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài),無芽胞,有鞭毛。

挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落,轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,36℃±1℃培養(yǎng)24 h 觀察結(jié)果。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑,無氣泡,斜面顏色不變 或紅色加深,有動力。

嗜鹽性試驗:挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落,分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰 胨水,36℃±1℃培養(yǎng)24 h,觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不 生長或微弱生長,在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。

 

確定鑒定 

取純培養(yǎng)物分別接種含3%氯化鈉的甘露醇試驗培養(yǎng)基、賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基、MR-VP培養(yǎng)基, 36℃±1℃培養(yǎng)24 h~48 h后觀察結(jié)果;3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行ONPG試驗可選擇生化 鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。

編輯:songjiajie2010

 
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