衛(wèi)生部近日匯總公布了《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑品種名單》,上海月旭公司從公布的黑名單中統(tǒng)計發(fā)現,包括三聚氰胺、蘇丹紅、孔雀石綠、人工合成色素等都在內。針對這些令人觸目驚心的食品添加劑,同時也為食品安全檢查和監(jiān)管工作提供有力的技術支持和保障,上海月旭公司迅速組織相關人員研制出了方便、快速、準確的檢測方法,現將LC-MS/MS檢測動物組織中β-興奮劑類藥物的方法公布如下:
1. 適用范圍
適用于動物組織中鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺藥物的檢測。
2. 提取
將5g動物組織、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸鈉溶液置于50 mL離心管中,10000 rpm均質2 min。6000 rpm下離心2 min,將上清液轉至另一離心管中。用15 mL乙酸乙酯重復提取一次,合并提取液。
向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的鹽酸溶液,渦動1 min,然后再6000 rpm下離心1 min,收集下層水相。重復萃取一次,合并下層水相,用2.5 mol/L NaOH溶液調節(jié)pH至5.2,待凈化。
3. 凈化
活化/平衡:依次向Welchrom? P-SCX(60mg/3mL)(上海月旭提供)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3mL 30 mmol/L鹽酸溶液,流出液棄去;
上樣:將上述提取液加入柱中,流出液棄去;
淋洗:依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗,淋洗液棄去,并將小柱抽干;
洗脫:用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脫,收集洗脫液,40℃下氮氣吹,50%乙腈復溶,過0.22μm濾膜,待分析;
4. 色譜質譜條件
4.1 色譜條件
色譜柱:Ultimate XB-C18 液相色譜柱(2.1mm* 100 mm, 3 μm)(上海月旭提供)
時間(min)
|
流動相A(%)
|
流動相B(%)
|
0
|
95
|
5
|
3
|
95
|
5
|
5
|
45
|
55
|
10
|
45
|
55
|
10.1
|
95
|
5
|
15.0
|
95
|
5
|
流動相:
A:0.1%甲酸水溶液
B:乙腈
梯度洗脫
流速:0.2 mL/min
進樣量: 10 μL
柱溫:35 °C
運行時間:12 min
4.2 質譜條件
掃描模式:MRM
離子源:ESI+
毛細管電離電壓:3.20 Kv
孔電壓(cone):45 V
電離源溫度:100 ℃
脫溶劑溫度:300 ℃
錐孔氣流速:50 L/Hr
脫溶劑氣流速:450 L/Hr
名稱
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母離子
|
子離子
|
孔電壓(V)
|
碰撞電壓(eV)
|
駐留時間(ms)
|
定量離子對
|
定性離子對
|
鹽酸克倫特羅
|
277.2
|
167.8
|
20
|
28
|
100
|
-
|
+
|
203.0
|
20
|
16
|
200
|
+
|
-
|
||
萊克多巴胺
|
302.17
|
106.8
|
18
|
28
|
100
|
-
|
+
|
164.1
|
18
|
14
|
200
|
+
|
-
|
||
鹽酸克倫特羅-D9
|
288.2
|
209.2
|
22
|
146
|
100
|
+
|
|
萊克多巴胺-D3
|
305.2
|
167.1
|
18
|
14
|
100
|
+
|
5. 結果
回收率和重現性實驗
將豬肌肉空白樣品經過液液萃取初步處理后,分別添加一定量的標準溶液,添加濃度分別為0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次內同一濃度做3次平行實驗,共3個批次。
添加水平(μg/kg)
|
||||||
分析物
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0.1
|
0.5
|
1.0
|
|||
Recovery (%)
|
RSD (%)
|
Recovery (%)
|
RSD (%)
|
Recovery (%)
|
RSD (%)
|
|
鹽酸克倫特羅
|
93.8
|
5.82
|
89.7
|
5.92
|
96.1
|
3.62
|
萊克多巴胺
|
95.3
|
7.43
|
103.5
|
3.42
|
97.4
|
4.55
|