一、目的

為證實ACQUITY UPLC^® I-Class系統(tǒng)可使柱外譜帶擴展達到最低，從而使進行高分離度及高通量UPLC^®分離時的分離效果更佳。以下將通過雜質(zhì)分析以及彈道梯度說明這些改善的重要性。

二、背景

已證實在多種應用中，采用填裝亞2-_m顆粒的色譜柱能夠改善色譜分離的峰容量以及分離度，從而大幅度提高分離度以及通量。

然而，為使一項指定分離所可能達到的分離度達到最大，需要使系統(tǒng)擴散性達到最小。屬于進樣器后系統(tǒng)流路的任何液體管路或連接均可導致柱外譜帶展寬。包括進樣閥、溶劑預熱裝置、連接管路、配件、及光學流通池。許多供應商已嘗試改善UHPLC系統(tǒng)的擴散性，但收效甚微。雖然可減小擴散性，但仍無法達到最佳從而可獲得窄孔UPLC色譜柱(內(nèi)徑2.1 mm)的全部優(yōu)點。這些色譜柱要求較低的流速，這使得分析每份樣品時的投資回報率更高，從而可在足夠的分離度下進行高效分離。

三、解決方案

ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)可減小柱外譜帶分布。新設計的UV檢測器流通池的光學路徑與先前的ACQUITY UPLC的光學路徑相同，可獲得同樣高的靈敏度；另外，已重新設計流體管路以及連接，以使譜帶擴散進一步減小。必須使用溶劑預熱器以使可導致柱上分散效應的溫度梯度減至最低。因此，溶劑預熱器的體積應足夠小，以確保使樣品簇(sample plug)以最小的擴散度到達色譜柱頭部，而且即使在高溫及高流速下也可提供極佳的溶劑加熱性能。根據(jù)您實驗室的需求，可在兩種樣品管理器(Sample Manager)中選擇一種來構(gòu)成ACQUITYUPLC I-Class系統(tǒng)。不管是使用固定定量環(huán)式(SM-FL)還是流通針式(SM-FTN)進樣器，均已通過采用小體積的針頭端口、連接管路、及內(nèi)部閥門通道使由進樣器所導致的擴散性減至最低。通常，固定環(huán)式進樣器的設計可使柱外譜帶擴展程度更小，這是由于其減小了注射器流動路徑的體積。通過對每一組件進行優(yōu)化，已使柱外譜帶擴展較之任一其他市售LC系統(tǒng)顯著降低。表1總結(jié)了在使用多種系統(tǒng)(包括UHPLC系統(tǒng))后所獲得的譜帶擴展數(shù)值。

ACQUITY UPLC家族在保持超高效分離的整體性方面的性能優(yōu)于所有其他系統(tǒng)，其中ACQUITYUPLC H-Class系統(tǒng)的譜帶擴展減少至9 _L，而ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)則減少至低至5.5 _L。

降低的系統(tǒng)擴散性可直接導致ACQUITY UPLCI-Class系統(tǒng)的分離度增加。分離可以達到彈道梯度，同時保持典型分析梯度中的分離度。圖2說明對丁卡因進行雜質(zhì)分析的結(jié)果。

采用ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)及購自供應商B的UHPLC系統(tǒng)，在相同條件下進行分離，結(jié)果ACQUITY UPLC I-Class的分離度顯著更佳。供應商B的系統(tǒng)按其建議安裝有光路長度為60 mm的流動池，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)生了明顯的譜帶擴展，以至于測不到肩峰。

四、小結(jié)

ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)具有不可比擬的性能，可用于當今最具挑戰(zhàn)性的分離任務。不管您的實驗室需要增加分離時的分離度還是需要增加樣品通量，它靈活的系統(tǒng)構(gòu)造都可使得UPLC色譜柱上的柱外譜帶擴展最低，從而獲得最佳的分離性能。