一、實驗室管理制度
1.實驗室應制定儀器配備管理、使用制度,藥品管理、使用制度,玻璃器皿管理,使用制度,并根據(jù)安全制度和環(huán)境條件的要求,本室工作人員應嚴格掌握,認真執(zhí)行。
2.進入實驗室必須穿工作服,進入無菌室換無菌衣、帽、鞋,戴好口罩,非實驗室人員不得進入實驗室,嚴格執(zhí)行安全操作規(guī)程。
3.實驗室內物品擺放整齊,試劑定期檢查并有明晰標簽,儀器定期檢查、保養(yǎng)、檢修, 嚴禁在冰箱內存放和加工私人食品。
4.各種器材應建立請領消耗記錄,貴重儀器有使用記錄,破損遺失應填寫報告;藥品、器材、菌種不經(jīng)批準不得擅自外借和轉讓,更不得私自拿出,應嚴格執(zhí)行《菌種保管制度》。
5.禁止在實驗室內吸煙、進餐、會客、喧嘩,實驗室內不得帶入私人物品,離開實驗室前認真檢查水、電、暖氣、門窗,對于有毒、有害、易燃、污染、腐蝕的物品和廢棄物品應按有關要求執(zhí)行。
6.科、室負責人督促本制度嚴格執(zhí)行,根據(jù)情況給于獎懲,出現(xiàn)問題立即報告,造成病原擴散等責任事故者,應視情節(jié)直至追究法律責任。
二、儀器配備、管理使用制度
1.食品微生物實驗室應具備下列儀器:培養(yǎng)箱、高壓鍋、普通冰箱、低溫冰箱、厭氧培養(yǎng)設備、顯微鏡、離心機、超凈臺、振蕩器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷凍干燥設備、勻質器、恒溫水浴箱、菌落計數(shù)器、生化培養(yǎng)箱,電位 pH計、高速離心機。
2.實驗室所使用的儀器、容器應符合標準要求,保證準確可靠,凡計量器具須經(jīng)計量部門檢定合格方能使用。
3.實驗室儀器安放合理,貴重儀器有專人保管,建立儀器檔案,并備有操作方法,保養(yǎng)、維修、說明書及使用登記本,做到經(jīng)常維護、保養(yǎng)和檢查,精密儀器不得隨意移動,若有損壞需要修理時,不得私自拆動、應寫出報告、通知管理人員,經(jīng)科室負責人同意填報修理申請、送儀器維修部門。
4.各種儀器(冰箱、溫箱除外),使用完畢后要立即切斷電源,旋鈕復原歸位,待仔細檢查后,方可離去。
5.一切儀器設備未經(jīng)設備管理人員同意,不得外借,使用后按登記本的內容進行登記。
6.儀器設備應保持清潔,一般應有儀器套罩。
7.使用儀器時,應嚴格按操作規(guī)程進行,對違反操作規(guī)程的因管理不善致使儀器械損壞,要追究當事者責任。
三、藥品管理、使用制度
1.依據(jù)本室檢測任務,制定各種藥品試劑采購計劃,寫清品名、單位、數(shù)量、純度、包裝規(guī)格,出廠日期等,領回后建立帳目,專人管理,每半年做出消耗表,并清點剩余藥品。
2.藥品試劑陳列整齊,放置有序、避光、防潮、通風干燥,瓶簽完整,劇毒藥品加鎖存放、易燃、揮發(fā)、腐蝕品種單獨貯存。
3.領用藥品試劑,需填寫請領單、由使用人和室負責人簽字,任何人無權私自出借或饋送藥品試劑,本單位科、室間或外單位互借時需經(jīng)科室負責人簽字。
4.稱取藥品試劑應按操作規(guī)范進行,用后蓋好,必要時可封口或黑紙包裹,不使用過期或變質藥品。
四、玻璃器皿管理、使用制度
1.根據(jù)測試項目的要求,申報玻璃儀器的采購計劃、詳細注明規(guī)格、產(chǎn)地、數(shù)量、要求,硬質中性玻璃儀器應經(jīng)計量驗證合格。
2.大型器皿建立帳目,每年清查一次,一般低值易耗器皿損壞后隨時填寫損耗登記清單。
3.玻璃器皿使用前應除去污垢,并用清潔液或2%稀鹽酸溶液浸泡24h后,用清水沖洗干凈備用。
4.器皿使用后隨時清洗,染菌后應嚴格高壓滅菌,不得亂棄亂扔。
五、安全制度
1.進入實驗室工作衣、帽、鞋必須穿戴整齊。
2.在進行高壓、干烤、消毒等工作時,工作人員不得擅自離現(xiàn)場,認真觀察溫度、時間,蒸餾易揮發(fā)、易燃液體時,不準直接加熱,應置水浴鍋上進行,試驗過程中如產(chǎn)生毒氣時應在避毒柜內操作。
3.嚴禁用口直接吸取藥品和菌液,按無菌操作進行,如發(fā)生菌液,病原體濺出容器外時,應立即用有效消毒劑進行徹底消毒,安全處理后方有離開現(xiàn)場。
4.工作完畢,兩手用清水肥皂洗凈,必要時可用新潔爾滅、過氧乙酸泡手,然后用水沖洗,工作服應經(jīng)常清洗,保持整潔,必要時高壓消毒。
5.實驗完畢,即時清理現(xiàn)場和實驗用具,對染菌帶毒物品,進行消毒滅菌處理。
6.每日下班,尤其節(jié)假日前后認真檢查水、暖氣、電和正在使用的儀器設備,關好門窗,方可離去。
六、環(huán)境條件要求
1. 實驗室內要經(jīng)常保持清潔衛(wèi)生,每天上下班應進行清掃整理,桌柜等表面應每天用消毒液擦拭,保持無塵,杜絕污染。
2. 實驗室應井然有序,不得存放實驗室外及個人物品、儀器等,實驗室用品要擺放合理,并有固定位置。
3. 隨時保持實驗室衛(wèi)生,不得亂扔紙屑等雜物,測試用過的廢棄物要倒在固定的箱筒內,并及時處理。
4. 實驗室應具有優(yōu)良的采光條件和照明設備。
5. 實驗室工作臺面應保持水平和無滲漏,墻壁和地面應當光滑和容易清洗。
6. 實驗室布局要合理,一般實驗室應有準備間和無菌室,無菌室應有良好的通風條件,如安裝空調設備及過濾設備,無菌室內空氣測試應基本達到無菌。
7. 嚴禁利用實驗室作會議室及其他文娛活動和學習場所。
第二節(jié) 實驗室技術操作要求
一、無菌操作要求
食品微生物實驗室工作人員,必須有嚴格的無菌觀念,許多試驗要求在無菌條件下進行,主要原因:一是防止試驗操作中人為污染樣品,二是保證工作人員安全,防止檢出的致病菌由于操作不當造成個人污染。
1.接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。
2.進行接種食品樣品時,必須穿專用的工作服、帽及拖鞋,應放在無菌室緩沖間,工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。
3.接種食品樣品時,應在進無菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球將手擦干凈。
4.進行接種所用的吸管,平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌,打開包裝未使用完的器皿,不能放置后再使用,金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼三次后使用。
5.從包裝中取出吸管時,吸管尖部不能觸及外露部位,使用吸管接種于試管或平皿時,吸管尖不得觸及試管或平皿邊。
6.接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作,接種細菌或樣品時,吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。
7.接種環(huán)和針在接種細菌前應經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲,必要時還要燒到環(huán)和針與桿的連接處,接種結核菌和烈性菌的接種環(huán)應在沸水中煮沸5min,再經(jīng)火焰燒灼。
8.吸管吸取菌液或樣品時,應用相應的橡皮頭吸取,不得直接用口吸。
二、無菌間使用要求
1.無菌間通向外面的窗戶應為雙層玻璃,并要密封,不得隨意打開,并設有與無菌間大小相應的緩沖間及推拉門,另設有0.5-0.7m2的小窗,以備進入無菌間后傳遞物品。
2.無菌間內應保持清潔,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作臺面,不得存放與實驗無關的物品。
3.無菌間使用前后應將門關緊,打開紫外燈,如采用室內懸吊紫外燈消毒時,需30W紫外燈,距離在1.0m處,照射時間不少于30min,使用紫外燈,應注意不得直接在紫外線下操作,以免引起損傷,燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭,除去上面灰塵和油垢,以減少紫外線穿透的影響。
4.處理和接種食品標本時,進入無菌間操作,不得隨意出入,如需要傳遞物品,可通過小窗傳遞。
5.在無菌間內如需要安裝空調時,則應有過濾裝置。
三、消毒滅菌要求
微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等,必須經(jīng)滅菌后方能使用。
(一)干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法
1.滅菌前準備
(1)所有需要滅菌的物品首先應清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密,如用金屬筒應將上面通氣孔打開。
(2)裝培養(yǎng)基的三角瓶塞,用紙包好,試管蓋好蓋,注射器須將管芯抽出,用紗布包好。
2.裝放
(1)干熱滅菌器:裝放物品不可過擠,且不能接觸箱的四壁。
(2)大型高壓蒸氣鍋:放置滅菌物品分別包扎好,直接放入消毒筒內,物品之間不能過擠。
3.設備檢查
(1)檢查門的開關是否靈活,橡皮圈有無損壞,是否平整。
(2)壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位,關好門和蓋,通蒸氣或加熱后,觀察是否漏氣,壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合,管道有無堵塞。
(3)對有自動電子程序控制裝置的滅菌器,使用前應檢查規(guī)定的程序,是否符合于進行滅菌處理的要求。
4.滅菌處理
(1)干熱滅菌法:此法適應于在干熱情況下,不損壞、不變質、不蒸發(fā)的物品、較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。
a.器械器皿應清洗后再干烤,以防附著在表面的污物炭化。
b.滅菌時安放物品不能過擠,不要直接接觸底和箱壁,物品之間留有空隙。
c.滅菌時將箱門關緊,接上電源,先將排氣孔打開約30min,排除滅菌器中的冷空氣,溫度升至160℃調節(jié)指示燈,維持1.5–2h。
d.滅菌完畢后或溫度升溫過程中,須在60℃以下才能打開箱門。
(2)手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行:
a.手提式高壓鍋在主體內加入3L清水,立式高壓鍋加水16L(重復使用時應將水量補足,水變混濁需更換)。
b.手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用)。
c.蓋好頂蓋擰緊,勿使漏氣;置滅菌器于火源上加熱,立式壓力鍋通上電源,并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣(水沸騰后排氣10-15min)。
d.關閉排氣閥,使蒸氣壓上升到規(guī)定要求,并維持規(guī)定時間(按滅菌物品性質與有關情況而定)。
e.達到規(guī)定時間后,對需干燥的物品,立即打開排氣閥排出蒸氣,待壓力恢復到零時,自然冷卻至60℃后開蓋取物,如為液體物品,不要打開排氣閥,而應立即將鍋去除熱源,待自然冷卻,壓力恢復至零,溫度降到60℃以下再開蓋取物,以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。
(3)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行:
a.關緊鍋門,打開進氣閥,將蒸氣引入夾層進行預熱,夾層內冷空氣經(jīng)阻氣器自動排出。
b.夾層達到預定溫度后,打開鍋室進氣閥,將蒸氣引入鍋室,鍋室內冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動排出。
c.待鍋室達到規(guī)定的壓力與溫度時,調節(jié)進氣閥,使保持恒定。
d.自然或人工降溫至60℃再開門取物,不得使用快速排出蒸氣法,以防突然降壓,液體劇烈沸騰或容器爆破。
e.使用自動程序控制式壓力蒸氣滅菌器,在放好物品關緊門后,應根據(jù)物品類別按動相應開關,以便按要求程序自動進行滅菌,滅菌時必須利用附設儀表記錄溫度與時間以備查,操作要求應嚴格按照廠家說明書進行。
5.滅菌溫度與時間
(1) 干熱滅菌器滅菌溫度160℃,1.5-2h。
(2) 壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間見表34-1。
物品 |
滅菌時間,min |
|
115℃ |
121℃ |
|
不含糖等耐熱物質培養(yǎng)基 |
||
含糖類等不耐熱培養(yǎng)基 染菌培養(yǎng)物 器械器皿 |
15-20 |
30 30 |
1.滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌,某些物質經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞,可用此法滅菌。
(1)將欲滅菌物品置于鍋內,蓋上頂蓋,打開排水口,使器內余水排盡。
(2)關閉排水口,打開進氣門,根據(jù)需要消毒10~20min.
(3)滅菌完畢關閉進氣門,取出物品待冷至室溫溫度,放入37℃溫箱過夜,次日仍按上述方法消毒,如此三次,即可達到滅菌目的。
2.血清凝固器使用方法,培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成份時,因高熱會破壞其營養(yǎng)成份,故用低溫,可使血清凝固,又可達到滅菌目的。
(1)在使用該法滅菌的血清等分裝時,需嚴格遵守無菌操作,試管、平皿也經(jīng)滅菌后使用。
(2)將培養(yǎng)基按要求使成斜面或高層,加足水后,接上電源,升溫75~90℃1h滅菌,放37℃溫箱過夜,再如此滅菌三次。
3. 煮沸消毒:可用煮鍋或煮沸消毒器,水沸騰后再煮5~15 min,也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min,加入0.02﹪甲醛,80℃煮60 min均可達到滅菌目的,但選用煮沸消毒的增消劑時,應注意對物品的腐蝕性.
4. 滅菌處理:滅菌后物品,按正常情況已屬無菌,從滅菌器中取出應仔細檢查放置,以免再度污染.
(1) 物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品使用.
(2) 取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無菌物品使用.
(3) 培養(yǎng)基或試劑等,應檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態(tài),未達到者應廢棄.
(4) 啟閉式容器,在取出時應將篩孔關閉.
(5) 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到污染,不可作為無菌物品使用.
(6) 取出的合格滅菌物品,應存放于貯藏室或防塵柜內,嚴禁與未滅菌物品混放.
(7) 凡屬合格物品,應標有滅菌日期及有效期限.
(8) 每批滅菌處理完成后,記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時間、操作者。
四、有毒有菌污物處理要求
微生物實驗所用實驗器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理,一律不得帶出實驗室。
1.經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應放在嚴密的容器或鐵絲筐內,并隼中存放在指定地點,待統(tǒng)一進行高壓滅菌。
2.經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物,必須經(jīng)121℃30 min高壓滅菌。
3.染菌后的吸管,使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中,最少浸泡24h(消毒液體不得低于浸泡的高度)再經(jīng)121℃30 min高壓滅菌。
4.涂片染色沖洗片的液體,一般可直接沖入下水道,烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯中,經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道,染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24 h后,煮沸洗滌。做凝隼試驗用的玻片或平皿,必須高壓滅菌后洗滌。
5.打碎的培養(yǎng)物,立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位,浸泡半小時后再擦拭干凈。
6.污染的工作服或進行烈性試驗所穿的工作服、帽、口罩等,應放入專用消毒袋內,經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。
五、培養(yǎng)基制備要求
培養(yǎng)基制備的質量將直接影響微生物生長。因為各種微生物對其營養(yǎng)要求不完全相同,培養(yǎng)目的的不同,各種培養(yǎng)基制備要求如下:
1. 根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱取,然后溶于蒸餾水中,在使用前對應用的試劑藥品應進行質量檢驗。
2. PH測定及調節(jié):PH測定要在培養(yǎng)基冷至室溫時進行,因在熱或冷的情況下,其PH有一定差異,當測定好時,按計算量加入堿或酸混勻后,應再測試一次。培養(yǎng)基PH值一定要準確,否則會影響微生物的生長或影響結果的觀察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培養(yǎng)基的PH降低或升高,故不宜滅菌壓力過高或次數(shù)太多,以免影響培養(yǎng)基的質量,指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調完PH后再加入。
3. 培養(yǎng)基需保持澄清,便于觀察細菌的生長情況,培養(yǎng)基加熱煮沸后,可用脫脂棉花或絨布過濾,以除去沉淀物,必要時可用雞蛋白澄清處理,所用瓊脂條要預先洗凈涼干后使用,避免因瓊脂含雜質而影響透明度。
4. 盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器,使用洗凈的中性硬質玻璃容器為好。
5. 培養(yǎng)基的滅菌既要達到完全滅菌目的,又要注意不因加熱而降低其營養(yǎng)價值,一般121℃15min即可,如為含有不耐高熱物質的培養(yǎng)基如糖類、血清、明膠等,則應采用低溫滅菌或間歇法滅菌,一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等,待基礎瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。
6. 每批培養(yǎng)基制備好后,應做無菌生長試驗及所檢菌株生長試驗。如果是生化培養(yǎng)基,使用標準菌株接種培養(yǎng),觀察生化反應結果,應呈正常反應,培養(yǎng)基不應貯存過久,必要時可置4℃冰箱存放。
7. 目前各種干燥培養(yǎng)基較多,每批需用標準菌株進行生長試驗或生化反應觀察,各種培養(yǎng)基用相應菌株生長試驗良好后方可應用,新購進的或存放過久的干燥培養(yǎng)基,在配制時也應測PH,使用時需根據(jù)產(chǎn)品說明書用量和方法進行。
8. 每批制備的培養(yǎng)基所用化學試劑、滅菌情況及菌株生長試驗結果、制作人員等應做好記錄,以備查詢。
六、樣品采集及處理要求
1. 所采集的檢驗樣品一定要具有代表性,采樣時應首先對該批食品原料、加工、運輸、貯藏方法條件、周圍環(huán)境衛(wèi)生狀況等進行詳細調查,檢查是否有污染源存在。
2. 根據(jù)食品的種類及數(shù)量,采樣數(shù)量及方法應按標準檢驗方法的要求進行。
3. 采樣應注意無菌操作,容器必須滅菌,避免環(huán)境中微生物污染,容器不得使用煤酚皂溶液,用新潔爾滅、酒精等消毒藥物滅菌,更不能含有此類消毒藥物或抗生素類藥物,以避免殺死樣品中的微生物,所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可應用。
4. 樣品采集后應立即送往檢驗室進行檢驗,送檢過程中一般不超過3h,如路程較遠,可保存在1~5℃環(huán)境中,如需冷凍者,則在凍存狀態(tài)下送檢。
5. 檢驗室收到樣品后,進行登記(樣品名稱、送檢單位、數(shù)量、日期、編號等),觀察樣品的外觀,如果發(fā)現(xiàn)有下列情況之一者,可拒絕檢驗。
(1) 樣品經(jīng)過特殊高壓、煮沸或其他方法殺菌者,失去代表原食品檢驗意義者。
(2) 瓶、袋裝食品已啟開者,熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者,即失去原食品形狀者(食物中毒樣品除外)。
(3) 按規(guī)定采樣數(shù)量不足者。
對送檢符合要求的樣品,檢驗室收到后,應立即進行檢驗,如果條件不具備,應置4℃冰箱存放,及時準備創(chuàng)造條件,然后進行檢驗。
6. 樣品檢驗時,根據(jù)其不同性狀,進行適當處理。
(1) 液體樣品接種時,應充分混合均勻,按量吸取進行接種。
(2) 固體樣品,用滅菌刀、剪取其不同部位共25g,置于225ml滅菌生理鹽水或其他溶液中,用均質器攪碎混勻后,按量吸取接種。
(3) 瓶、袋裝食品應用滅菌操作啟開,根據(jù)性狀選擇上述方法處理后接種。
七、樣品檢驗、記錄和報告的要求
1. 檢驗室收到樣品后,首先進行外觀檢驗,及時按照國家標準檢驗方法進行檢驗,檢驗過程中要認真、負責、嚴格進行無菌操作,避免環(huán)境中微生物污染。
2. 樣品檢驗過程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結果等均要用文字寫出試驗紀錄,以作為對結果分析、判定的依據(jù),記錄要求詳細、清楚、真實、客觀、不得涂改和偽造。
3. 經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物,必須經(jīng)121℃30min高壓滅菌。
4. 染菌后的吸管,使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中,最少浸泡24h(消毒液體不得低于浸泡的高度)再經(jīng)121℃30min高壓滅菌。
5. 涂片染色沖洗片的液體,一般可直接沖入下水道,烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯中,經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道,染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24h后,煮沸洗滌。做凝隼試驗用的玻片或平皿,必須高壓滅菌后洗滌。
6. 打碎的培養(yǎng)物,立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位,浸泡半小時后再擦拭干凈。