一、這些細(xì)則要遵守
實驗室參加實驗的人員,必須整潔、文明、肅靜。
進(jìn)入實驗室的所有人員必須遵守實驗室的規(guī)章制度,實驗室為無煙實驗室,嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)吸煙,不得吃口香糖,不得隨地吐痰和亂扔紙張。
參加實驗的人員在實驗過程中,要注意保持室內(nèi)衛(wèi)生及良好的實驗秩序。實驗結(jié)束后,必須及時做好清潔整理工作,實驗人員必須將工作臺、儀器設(shè)備、器皿等清潔干凈,并將儀器設(shè)備和器皿按規(guī)定歸類放好,不能任意搬動和堆放。所有實驗所產(chǎn)生的廢物放入廢物箱內(nèi),并及時處理,清理好現(xiàn)場。
在每次實驗結(jié)束后,實驗人員必須對實驗室進(jìn)行清掃。
實驗室主任負(fù)責(zé)安排日常的衛(wèi)生清掃、儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)工作。實驗室成員有參加本室清掃及維護(hù)保養(yǎng)儀器設(shè)備的義務(wù)。
實驗室內(nèi)各種設(shè)備、物品擺放要合理、整齊,與實驗無關(guān)的物品禁止存放在實驗室。
實驗室為保持室內(nèi)地面、實驗臺、設(shè)備和工作環(huán)境的干凈整潔,必須堅持每天一小掃,每周一大掃的衛(wèi)生制度,每年徹底清掃1~2次。
實驗室內(nèi)的儀器設(shè)備、各人實驗臺架、凳和各種設(shè)施擺放整齊,并經(jīng)常擦拭,保持無污漬、無灰塵。
衛(wèi)生責(zé)任人應(yīng)對實驗室桌面、地面及時打掃。注意保持室內(nèi)場地和儀器設(shè)備的整潔衛(wèi)生。
實驗室內(nèi)雜物要清理干凈,有機(jī)溶劑、腐蝕性液體的廢液必須盛于廢液桶內(nèi),貼上標(biāo)簽,統(tǒng)一回收處理。
保持室內(nèi)地面無灰塵、無積水、無紙屑等垃圾。
實驗室整體布局須合理有序,地面、門窗等管道線路和開關(guān)板上無積灰與蛛網(wǎng)。
下班前必須搞好清潔衛(wèi)生,關(guān)好門窗、水龍頭,斷開電源,清理場地。
不得將任何與實驗無關(guān)的物品帶入實驗室。
對于亂擺放的實驗藥品、儀器等,實驗室負(fù)責(zé)人有權(quán)沒收或當(dāng)做廢品處理,實驗工作人員不得有任何異議。
二、清洗實驗室器皿標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)
目的:去除器皿上的殘余物,使器皿可重復(fù)使用。
范圍:化學(xué)試驗室樣品處理過程中使用的器具,如剪鉗、刀片、塑料籃、玻璃容器、陶瓷坩鍋、微波消解罐等.
【操作規(guī)程】
樣品拆分工具
1、用800#砂紙輕輕打磨掉金屬工具表面的銹漬,不要過度用力,以免磨掉保護(hù)涂層,然后,用脫脂棉蘸無水乙醇擦拭,至脫脂棉上看不到污漬為止。
2、剪鉗,刀片,研缽使用前必須用脫脂棉蘸無水乙醇擦拭接觸樣品部位2~3遍,脫脂棉上看不到污漬方可使用。
3、裝樣品的塑料籃每月至少用洗潔精清洗一次,如有明顯斑點(diǎn)、粉塵、則應(yīng)立即清洗。
4、樣品拆分臺面每天中午11:30~12:00清理一次,17:30~18:00清理一次,所有工具應(yīng)整齊,按類別擺放,臺面用紙巾擦拭,應(yīng)無黑斑。
5、玻璃容器(燒杯,試管,漏斗,三角燒瓶,培養(yǎng)皿)、玻璃量器(容量瓶,量筒,移液管)、新購置的玻璃器皿應(yīng)在硝酸(10%)溶液內(nèi)先浸泡6小時方可使用。
6、 應(yīng)把玻璃器皿內(nèi)的溶液倒入廢液桶,自來水沖洗一遍后,方可收集一起浸泡,以免交叉污染。
7、玻璃容器,玻璃量器盡可能分開用自來水浸泡,且讓水能完全進(jìn)入器皿中,不應(yīng)留有氣泡。
8、燒杯,試管,漏斗,三角燒瓶,培養(yǎng)皿等可用瓶刷沾上洗衣粉或洗潔精刷洗,然后用自來水充分沖洗干凈。玻璃量器不可刷洗。
9、玻璃量器(容量瓶,量筒,移液管)應(yīng)用上洗衣粉或洗潔精涮洗,最好用熱水(60~70℃)。
10、玻璃器皿經(jīng)洗滌后,若內(nèi)壁的水是均勻分布成一薄層,表示油垢完全洗凈,若掛有水珠,則還需用洗滌液浸泡數(shù)小時,然后再用自來水充分沖洗。
三、洗滌液的配制與使用
洗滌液的配制洗滌液分濃溶液與稀溶液兩種,配方如下:
【濃溶液】
重鉻酸鈉或重鉻酸鉀(分析純)50g
自來水 150ml
濃硫酸(分析純) 800ml
【稀溶液】
重鉻酸鈉或重鉻酸鉀(分析純) 50g
自來水 850ml
濃硫酸(分析純) 100ml
配法都是將重鉻酸鈉或重鉻酸鉀先溶解于自來水中,可慢慢加溫,使溶解,冷卻后徐徐加入濃硫酸,邊加邊攪動。配好后的洗滌液應(yīng)是棕紅色或桔紅色。貯存于有蓋容器內(nèi)。
帶好長橡膠手套,除去器皿內(nèi)的水,慢慢倒入洗滌液,轉(zhuǎn)動器皿,使洗液充分浸潤不干凈的器壁,數(shù)分鐘后把洗液倒回洗液瓶中,用自來水沖洗器皿。若器壁上粘有少量殘渣,可先將洗滌液加熱,加入少量洗液浸泡殘渣。
注意: 本操作有危險性!
(a)洗滌液中的硫酸具有強(qiáng)腐蝕作用,千萬別忘記將器皿取出沖洗;洗滌液若沾污衣服和皮膚應(yīng)立即用水洗,再用蘇打水或氨液洗;如果濺在桌椅上,應(yīng)立即用水洗去或濕布抹去;
(b)玻璃器皿投入前,應(yīng)盡量干燥,避免洗滌液稀釋;
(c)此液的使用僅限于玻璃和瓷質(zhì)器皿,不適用于金屬和塑料器皿;
(d)有大量有機(jī)質(zhì)的器皿應(yīng)先行擦洗,然后再用洗滌液,這是因為有機(jī)質(zhì)過多,會加快洗滌液失效。此外,洗滌液雖為很強(qiáng)的去污劑,但也不是所有的污跡都可清除;
(e)盛洗滌液的容器應(yīng)始終加蓋,以防氧化變質(zhì);
(f)洗滌液可反復(fù)使用,但當(dāng)其變?yōu)槟G色時即已失效,不能再用。
經(jīng)洗滌過的玻璃容器倒置,至無水滴滴下用硝酸(10%)溶液浸泡至少12小時,用DI水涮洗后方可使用。浸泡溶液每星期檢測一次Pb Cr Cd Hg含量,超過1ppm則更換溶液。
玻璃量器(容量瓶,量筒,移液管) 用硝酸(30%)溶液浸泡至少12小時后,用DI水涮洗后,在無塵處倒置晾干水分,自然干燥。
玻璃容器(燒杯,試管,漏斗,三角燒瓶,培養(yǎng)皿) 放在電烘箱中烘干,烘箱溫度為105℃,保持通風(fēng)烘1~2h即可。
清洗好的玻璃儀器要分門別類地存放,以便取用。
塑料器皿
塑料漏斗參照玻璃漏斗清洗步驟,可與玻璃漏斗一同清洗。
聚四氟乙烯燒杯和微波消解罐須與玻璃器皿分開處理,先用自來水沖洗干凈后,再用配制好的酸液浸泡至少12h。
酸液配制方法:500mL硝酸+100mL冰乙酸,DI水定容于1000mL容量瓶。
酸液每半個月檢測一次Pb,超過5ppm則更換溶液
注意:勿用毛刷刷洗塑料器皿!
陶瓷坩鍋
可參照聚四氟乙烯燒杯和微波消解罐清洗方法。
若依然不能清洗干凈,將陶瓷坩鍋置于電熱板上加熱至無水份后,放入馬氟爐中,保持800℃烤2h,取出冷卻。
清洗好的陶瓷坩鍋內(nèi)壁應(yīng)潔白無深色斑點(diǎn)。
臨床基因擴(kuò)增(PCR)檢驗實驗室規(guī)范
為避免污染,必須嚴(yán)格遵循《臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室。
試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
貯存試劑和用于標(biāo)本制備的材料應(yīng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),不能經(jīng)過產(chǎn)物分析區(qū)。
含反應(yīng)混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離心數(shù)秒。
主反應(yīng)混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性通過預(yù)試驗來檢查,評價結(jié)果必須有書面報告。
在整個本區(qū)的實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。
嚴(yán)禁用嘴吸取液體,加樣器和吸頭等必須經(jīng)高壓處理。
工作結(jié)束后必須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔。
標(biāo)本制備區(qū)
正確使用加樣器。由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動!
用過的加樣器吸頭必須放入專門的消毒容器內(nèi)。實驗室桌椅表面每次工作后都要清潔,實驗材料如出現(xiàn)外濺,分別處理并作記錄。
對實驗臺適當(dāng)?shù)淖贤庹丈?254nm波長,與工作臺面近距離)適合于滅活去污染?梢苿幼贤饩管燈可用來確保工作后對實驗臺面的充分照射。
樣本處理對核酸擴(kuò)增有很大影響,必須使用有效的核酸提取方法,可在開展臨床標(biāo)本檢測前對提取方法進(jìn)行評價。
用于RNA擴(kuò)增檢測的樣本制備好以后,應(yīng)立即進(jìn)行cDNA合成,因為cDNA鏈較RNA穩(wěn)定,保存相對容易。為保證逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的需要,應(yīng)在標(biāo)本制備區(qū)設(shè)置一個以上的溫育裝置。
cDNA合成的理想溫度依所使用的酶而定,傾向于使用一步法:
即使用在擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液條件下具有逆轉(zhuǎn)錄活性的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,其較cDNA合成后再開蓋以調(diào)節(jié)緩液或加入聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增發(fā)生污染的可能性降低。
待測RNA的cDNA拷貝須保存在標(biāo)本制備區(qū),不得在本區(qū)對樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
擴(kuò)增區(qū)
不能從本區(qū)再進(jìn)入任何“上游”區(qū)域,可降低本區(qū)的氣壓以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。
為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動。如有加樣則應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。
打開預(yù)處理過的反應(yīng)混合液時必須防止液體濺出,尤其是在巢式擴(kuò)增步驟之間。一個簡單的方法是在打開反應(yīng)管前快速離心數(shù)秒!
完成操作及每天工作后都必須對實驗室臺面進(jìn)行清潔和消毒,紫外照射方法與前面區(qū)域相同。如有溶液濺出,必須處理并作出記錄。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
下述操作在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行:擴(kuò)增片段的測定。
核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣(如,膜上或微孔板上探針雜交方法、瓊脂糖凝膠電泳等)
目前國內(nèi)的商品試劑盒絕大部分均采用非同位素標(biāo)記的微孔板上探針雜交方法,PCR-ELISA方法,也有膜上探針雜交方法。
注:本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。
小結(jié)
嚴(yán)格按照實驗室清潔衛(wèi)生要求開展各類實驗,是保證實驗有效運(yùn)行與實驗員安全工作的前提。要不斷完善實驗室衛(wèi)生管理體系,加強(qiáng)實驗員的安全意識,保護(hù)員工的人身安全,確保實驗室工作在清潔、安全、有序的條件下進(jìn)行。