經(jīng)驗(yàn)總結(jié)一:液質(zhì)使用經(jīng)驗(yàn)與禁忌
1、酸性物質(zhì)適合做負(fù)離子檢測(cè),所以流動(dòng)相偏堿性較合適,促使其解離,堿性物質(zhì)適合做正離子檢測(cè),流動(dòng)相中適當(dāng)?shù)募尤胨,促使其形成正離子,流動(dòng)相中適當(dāng)加一些醋酸鈉(或者醋酸銨),可形成加鈉的正離子或者加銨的正離子。
液質(zhì)分析中推薦使用的流動(dòng)相和添加劑
2、糖苷類(lèi)的物質(zhì)在做FAB和esi(+)時(shí),[M+Na]峰往往比[M+H]峰要強(qiáng),此為經(jīng)驗(yàn),原因只是推測(cè)可能和天然產(chǎn)物的提取過(guò)程有關(guān);鹽類(lèi)化合物如鹽酸鹽、硫酸鹽在質(zhì)譜中酸的部分一般不會(huì)出現(xiàn);二羧酸鹽(esi負(fù)離子模式)除了分子離子峰外,會(huì)出現(xiàn)連續(xù)掉44的兩個(gè)峰,為失去羧酸根的離子,這三個(gè)峰非常特征,但是會(huì)受錐孔電壓的影響,調(diào)低電壓譜圖會(huì)更漂亮。
3、胺類(lèi)物質(zhì)做esi質(zhì)譜時(shí)要注意進(jìn)樣量要少,因?yàn)楹苋菀纂x子化,不易沖洗干凈,會(huì)影響后面樣品的測(cè)定。像三乙胺在液質(zhì)聯(lián)用時(shí)不能用于調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值。若不慎引入三乙胺,在正離子檢測(cè)時(shí)總會(huì)出現(xiàn)很強(qiáng)的102峰(三乙胺的[M+H])。
4、質(zhì)譜用水一般用娃哈哈純凈水之類(lèi)的就很好;質(zhì)譜用甲醇和乙腈,換用了很多品牌,發(fā)現(xiàn)Merck的還是稍微好一些;Finnigan用的氮?dú)獠灰欢ㄒ玫揭旱,用普通的鋼瓶氣就可以了,可能還省錢(qián)些;建議大家買(mǎi)一個(gè)好一點(diǎn)的手電筒和一個(gè)放大鏡,手電筒用來(lái)看源里面,放大鏡看你割的毛細(xì)管平整。
5、質(zhì)譜的基線其實(shí)跟液相的紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器一樣,基線高的原因不外乎內(nèi)部和外部的原因。
(1)你選擇的流動(dòng)相在質(zhì)譜的響應(yīng)比較高,比如水相比較多的時(shí)候,噪音比較大些;還有如果鹽含量比較大的時(shí)候,噪音更大些。
(2)檢測(cè)器的靈敏度越高的時(shí)候,噪音應(yīng)該越高。如果質(zhì)譜的污染比較嚴(yán)重時(shí),基線肯定比較高。比如離子阱檢測(cè)器,用得久了,阱中的離子就會(huì)增多,一方面降低了質(zhì)譜的靈敏度,另一方面增加了基線噪音。
(3)質(zhì)譜的基線很多時(shí)候還跟你選擇的離子寬度有關(guān)。比如你作選擇離子掃描的時(shí)候,基線就低些。你作選擇反應(yīng)掃描的時(shí)候,離子寬度不要選得太寬,太寬噪音就高些。
(4)多級(jí)質(zhì)譜一般做二級(jí)或三級(jí)質(zhì)譜,基線噪音就低很多。
6、質(zhì)譜維護(hù)經(jīng)驗(yàn)交流:做樣前-檢查氮?dú),流?dòng)相,質(zhì)譜儀的真空度,毛細(xì)管溫度…
(1)最好不用直接進(jìn)樣(容易污染離子源);
(2)做聯(lián)用時(shí)最好分流(a可以使用常規(guī)柱,b縮短分析時(shí)間,c 延長(zhǎng)質(zhì)量分析器壽命);
(3)最好使用在線切換閥,降前每個(gè)樣品的前后1-2分鐘的流動(dòng)相切入廢液(避免樣品中的鹽進(jìn)入質(zhì)譜,做Sequence時(shí)可以把平衡柱子的流動(dòng)相切入廢液);
(4)開(kāi)始聯(lián)用前,直接運(yùn)行質(zhì)譜數(shù)分鐘,可以先將溫度(毛細(xì)管溫度和離子源溫度(APCI))加熱到預(yù)設(shè)定值(如果是APCI源還可以避免將燒掉heater,太貴了,最好別燒);
(5)待機(jī)時(shí)將切換閥置于waste,避免剛開(kāi)液相時(shí)將流動(dòng)相打入離子源;
(6)關(guān)機(jī)前毛細(xì)管的溫度先降下來(lái),穩(wěn)定一段時(shí)間后再關(guān)閉電源,避免風(fēng)扇停止轉(zhuǎn)動(dòng)后毛細(xì)管外圍的熱量向里擴(kuò)散,容易引起內(nèi)部線路及電子元器件老化加速;
(7)每天清理毛細(xì)管口外部,擦洗干凈,每次停機(jī)時(shí)注意清洗Skimmer,用無(wú)塵擦拭紙,kimberly那種;
(8)如果用的是鋼瓶而且天天做樣的話,將兩個(gè)鋼瓶并聯(lián),當(dāng)然,一月不做一次的話就算了;
(9)做定量時(shí)注意離子源噴針的具體位置,否則標(biāo)準(zhǔn)曲線就不能用了;
(10)不要不經(jīng)過(guò)柱子分離進(jìn)行定量分析,結(jié)果不可靠(競(jìng)爭(zhēng)性抑制目標(biāo)分子離子化);
(11)如果是負(fù)離子檢測(cè)的話,可以相流動(dòng)相中加入少量異丙醇;
(12)不要使用不揮發(fā)性鹽,如果使用揮發(fā)性鹽,但濃度不要超過(guò)20mmol/L;
(13)需要使用酸的情況下可以用甲酸,乙酸,三氟乙酸可以用,但能用甲酸或乙酸時(shí)就別用TFA;
7、理論上液質(zhì)聯(lián)用禁止使用任何不揮發(fā)性的緩沖鹽,如果需要盡量使用諸如乙酸氨等揮發(fā)性鹽,濃度不要超過(guò)20mmol/L。
對(duì)于不揮發(fā)性的緩沖鹽,如果你的儀器有吹掃捕集的話也可使用,但一定要小心。萬(wàn)不得已也不要用,首先有不揮發(fā)鹽是得不到好的離子流的,其次鹽留在質(zhì)譜中很難除掉,除非停機(jī)清洗,不然一直會(huì)影響其他樣品的分析。
可以找質(zhì)譜友好的條件來(lái)做液質(zhì)聯(lián)機(jī),例如色譜條件為20mM磷酸鹽的水/乙腈流動(dòng)相,做液質(zhì)聯(lián)機(jī)的時(shí)候就可以用醋酸銨代替,然后用醋酸調(diào)節(jié)pH值與磷酸鹽的一致即可。
除了難揮發(fā)的鹽,三乙胺、表面活性劑、還有高濃度(>0.5%)的TFA,都對(duì)質(zhì)譜不好,液質(zhì)聯(lián)用的流動(dòng)相中應(yīng)該避免。
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)二:(質(zhì)量定量分析經(jīng)驗(yàn))
1、要用目標(biāo)離子的碎片定量,特征性強(qiáng),排除干擾;
2、在定量分析的方法設(shè)置上,盡可能提高掃描速率,提高準(zhǔn)確率和重復(fù)性(可以通過(guò)a減小掃描質(zhì)量數(shù)的范圍來(lái)提高目標(biāo)峰的掃描次數(shù),或 將一個(gè)樣品全部分析時(shí)間斷分成n個(gè)segments,對(duì)目標(biāo)離子單獨(dú)設(shè)置掃描模式);
3、一定要通過(guò)色譜柱分離后定量分析,避免競(jìng)爭(zhēng)性離子的存在影響目標(biāo)離子的離子化效率;如果目標(biāo)分子未與競(jìng)爭(zhēng)性分子完全分開(kāi),則在離子化過(guò)程中導(dǎo)致目標(biāo)分子的離子化效率降低,導(dǎo)致樣品分子的定量結(jié)果偏低,當(dāng)然標(biāo)準(zhǔn)濃度的樣品也要用相同的方法分析;
4、如果樣品都是純品的話可以不經(jīng)過(guò)色譜柱直接進(jìn)樣分析,包括做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品(雖然不建議直接進(jìn)樣分析);
5、如果用的離子源的噴針位置是可移的話,一定要記住做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)其位置,否則其位置移動(dòng)后在相同的條件下進(jìn)入質(zhì)譜的離子流量會(huì)發(fā)生改變,標(biāo)準(zhǔn)曲線就不能使用了!對(duì)于調(diào)用的質(zhì)譜方法不要改動(dòng)shealth gas and aux gas 的流速,否則會(huì)影響進(jìn)入質(zhì)譜的樣品量;
6、所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線一個(gè)月后如果想重復(fù)使用,則用QC樣品檢驗(yàn)一下該標(biāo)準(zhǔn)曲線;
7、對(duì)于已經(jīng)建立好的分析方法在掃描范圍、流動(dòng)相的組成、梯度或流速等方面不要作任何改動(dòng),否則,標(biāo)準(zhǔn)曲線要重作。掃描范圍改變目標(biāo)峰的掃描次數(shù)、流動(dòng)相組成改變離子化效率,流速改變色譜峰的保留時(shí)間和峰寬;
8、離子阱的強(qiáng)項(xiàng)在于多級(jí)-定性,四級(jí)桿的強(qiáng)項(xiàng)在于定量;
9、對(duì)于熱穩(wěn)定性不好的樣品可以通過(guò)提高氣速,降低毛細(xì)管溫度的方法保證定量分析的重復(fù)性;一旦方法固定后不要輕易改動(dòng)。
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)三:解析圖譜
解析未知樣的質(zhì)譜圖,大致按以下程序進(jìn)行。
1、解析分子離子區(qū)
(1) 標(biāo)出各峰的質(zhì)荷比數(shù),尤其注意高質(zhì)荷比區(qū)的峰。
(2) 識(shí)別分子離子峰。首先在高質(zhì)荷比區(qū)假定分子離子峰,判斷該假定分子離子峰與相鄰碎片離子峰關(guān)系是否合理,然后判斷其是否符合氮律。若二者均相符,可認(rèn)為是分子離子峰。
(3) 分析同位素峰簇的相對(duì)強(qiáng)度比及峰與峰間的Dm值,判斷化合物是否含有Cl、Br、S、Si等元素及F、P、I等無(wú)同位素的元素。
(4) 推導(dǎo)分子式,計(jì)算不飽和度。由高分辨質(zhì)譜儀測(cè)得的精確分子量或由同位素峰簇的相對(duì)強(qiáng)度計(jì)算分子式。若二者均難以實(shí)現(xiàn)時(shí),則由分子離子峰丟失的碎片及主要碎片離子推導(dǎo),或與其它方法配合。
(5) 由分子離子峰的相對(duì)強(qiáng)度了解分子結(jié)構(gòu)的信息。分子離子峰的相對(duì)強(qiáng)度由分子的結(jié)構(gòu)所決定,結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性大,相對(duì)強(qiáng)度就大。對(duì)于分子量約200的化合物,若分子離子峰為基峰或強(qiáng)蜂,譜圖中碎片離子較少、表明該化合物是高穩(wěn)定性分子,可能為芳烴或稠環(huán)化合物。
例如:萘分子離子峰m/z 128為基峰,蒽醌分子離子峰m/z 208也是基峰。
分子離子峰弱或不出現(xiàn),化合物可能為多支鏈烴類(lèi)、醇類(lèi)、酸類(lèi)等。
2、解析碎片離子
(1) 由特征離子峰及丟失的中性碎片了解可能的結(jié)構(gòu)信息。
若質(zhì)譜圖中出現(xiàn)系列CnH2n+1峰,則化合物可能含長(zhǎng)鏈烷基。若出現(xiàn)或部分出現(xiàn)m/z 77,66,65,51,40,39等弱的碎片離子蜂,表明化合物含有苯基。若m/z 91或105為基峰或強(qiáng)峰,表明化合物含有芐基或苯甲;。若質(zhì)譜圖中基峰或強(qiáng)峰出現(xiàn)在質(zhì)荷比的中部,而其它碎片離子峰少,則化合物可能由兩部分結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定,其間由容易斷裂的弱鍵相連。
(2) 綜合分析以上得到的全部信息,結(jié)合分子式及不飽和度,提出化合物的可能結(jié)構(gòu)。
(3) 分析所推導(dǎo)的可能結(jié)構(gòu)的裂解機(jī)理,看其是否與質(zhì)譜圖相符,確定其結(jié)構(gòu),并進(jìn)一步解釋質(zhì)譜,或與標(biāo)準(zhǔn)譜圖比較,或與其它譜(1H NMR、13C NMR、IR)配合,確證結(jié)構(gòu)。