但胚胎移植技術(shù)科技含量高,投資成本大,使該技術(shù)在國(guó)內(nèi)畜牧良種繁育方面應(yīng)用力度不大,移植妊娠率相對(duì)不高,制約了畜牧良種繁育推廣和畜牧業(yè)快速發(fā)展。
陜西省布爾羊良種繁育中心從1998年開始,連續(xù)引進(jìn)泰國(guó)、澳大利亞、南非等國(guó)外胚胎生物工程專家,與西農(nóng)大專家合作開展山羊胚胎移植上千例,取得了很好的成果。從供體和受體的選擇,供體的超排,受體同期化發(fā)情處理,胚胎回收、沖洗、鑒定,受體移植,受體羊的飼養(yǎng)等方面做了深入研究,總結(jié)出提高山羊胚胎移植成功率的主要因素。
選擇優(yōu)秀的供體和受體
供體 選擇表現(xiàn)型好、生產(chǎn)水平高、遺傳性穩(wěn)定、體質(zhì)健康、發(fā)情周期正常、無生殖道疾病、有1胎~2胎正常繁殖史的2歲~5歲青壯年羊做供體。
受體 要求體形大、無生殖道疾病、產(chǎn)奶量高、哺乳力強(qiáng)的空懷母羊?yàn)槭荏w,受體羊年齡2歲~5歲且有1胎~2胎正常繁殖史。供體和受體羊的比例一般為1∶10~1∶12為宜。
加強(qiáng)供體和受體羊的飼養(yǎng)管理
供體和受體羊在手術(shù)前3個(gè)月~4個(gè)月必須全部選留到位,并做好疫病的預(yù)防接種及必要的疫病監(jiān)測(cè)及驅(qū)蟲等工作。從術(shù)前2個(gè)月加強(qiáng)飼養(yǎng),將日糧中的蛋白質(zhì)逐漸提高到20%~30%,要求羊身體健康,中上等膘情,防止過肥或過瘦。供體羊特別在處理期間及受體羊胚移后不能突然改變飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)方式及飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn),避免長(zhǎng)途運(yùn)輸、意外驚嚇等應(yīng)激影響導(dǎo)致羊不排卵、胚胎退化及死亡,影響移植受胎率。
選擇適宜的胚胎移植季節(jié)
山羊胚胎移植最佳適宜的季節(jié)為8月~10月。7月羊處于發(fā)情初期,出現(xiàn)發(fā)情不排卵的比率較高,11月移植所產(chǎn)生的羔羊在次年4月其成活率及生長(zhǎng)速度較低。應(yīng)避開最熱和最冷的季節(jié),氣溫高于32℃,移植成功率較低。另外,陰雨天對(duì)移植成功率也有一定影響,應(yīng)盡量避開。
使用最佳藥品,準(zhǔn)確把握劑量
胚胎移植技術(shù)在國(guó)內(nèi)運(yùn)用規(guī)模尚小,沒有專門生產(chǎn)胚胎移植藥品的廠家,目前國(guó)內(nèi)使用的胚胎移植藥品大部分都是科研單位自己研制,沒有大量應(yīng)用臨床實(shí)踐。選擇進(jìn)口藥物釋放性能好,效價(jià)穩(wěn)定,筆者在胚胎移植過程中,多年使用進(jìn)口硅膠陰道栓,其操作方法簡(jiǎn)單,處理效果好,受到國(guó)內(nèi)專家好評(píng)。筆者總結(jié)出胚胎移植采用21天藥物處理程序,在第9天換栓1次,注射加拿大生產(chǎn)的FSH(Foltropin-r),劑量為200毫克~300毫克為宜,臂部肌肉分4天8次遞減注射,PMSG劑量以200IU為宜,受體同期發(fā)情利用率可達(dá)87.7%,撤栓時(shí)間受體應(yīng)比供體早撤栓12小時(shí)。供體羊注射PMSG劑量大則產(chǎn)生的未受精卵多,發(fā)情持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。
做好供體羊配種及受體羊試情記錄
發(fā)情測(cè)定以供受體羊開始接受爬跨時(shí)間到拒絕接受爬跨時(shí)間為準(zhǔn),以6小時(shí)~8小時(shí)進(jìn)行1次測(cè)情,一般用結(jié)扎輸精管后3個(gè)月的試情公羊測(cè)情,供體配種采用人工授精與公羊本交相結(jié)合的方式進(jìn)行,間隔6小時(shí)配種1次,胚胎有效利用率為99.8%,從發(fā)情開始至發(fā)束為止,一定要做好詳細(xì)的登記。
抓好胚胎移植術(shù)前的消毒工作
手術(shù)前對(duì)手術(shù)器械進(jìn)行高壓(15磅壓力30分鐘)、干熱(每小時(shí)220℃)滅菌,場(chǎng)地用紫外線照射30分鐘,噴灑消毒劑進(jìn)行手術(shù)場(chǎng)地及環(huán)境消毒,手術(shù)過程做到無菌操作。手術(shù)前受體禁食24小時(shí),限量飲水,以防止手術(shù)前腹壓過大,造成手術(shù)困難和羊生殖道的損傷。
選擇正確的沖胚方法
供體采胚多采用手術(shù)沖胚法進(jìn)行,子宮角采集胚胎應(yīng)于配種后6天~6天半進(jìn)行,輸卵管沖胚法在配種后2天~3天進(jìn)行;麻醉以國(guó)產(chǎn)藥品846合劑肌肉注射進(jìn)行全身麻醉,同時(shí)準(zhǔn)備國(guó)產(chǎn)速醒靈解麻藥品進(jìn)行解救以防意外;手術(shù)部位利用電動(dòng)剪進(jìn)行剪毛,5%的碘酊消毒,切口應(yīng)在乳房前腹中線兩側(cè)2厘米~3厘米處手術(shù)切口,以提高羊可手術(shù)次數(shù),創(chuàng)口以3厘米~4厘米為宜;當(dāng)摸到子宮角或卵巢后不要強(qiáng)抓,用食指和中指輕輕夾住子宮角或輸卵管,緩慢牽引出切口外,不可用力過大或觸壓卵巢;進(jìn)行子宮角沖胚,沖胚液以20毫升~30毫升為宜,沖胚管(進(jìn)口)氣囊注入空氣為3毫升~4毫升;沖洗干凈手術(shù)部位的血凝塊,向腹腔內(nèi)注入含青鏈霉素的溫?zé)嵘睇}水250毫升~500毫升,將子宮角或輸卵管完全還納腹腔后,檢查腹腔有無異物,然后進(jìn)行腹膜縫合,依次為肌肉、皮膚縫合,皮膚涂紅霉素軟膏。
胚胎質(zhì)量鑒定
將沖出的胚胎倒入檢卵皿內(nèi),在顯微鏡下進(jìn)行檢查,評(píng)定等級(jí),按其質(zhì)量分為A、B、C三級(jí),將C級(jí)胚胎及未受精卵、死胚、變性胚胎等不可用胚胎棄掉。一般根據(jù)受體羊黃體發(fā)育程度進(jìn)行1枚~3枚移植。盡量將兩枚胚胎同時(shí)移植入有黃體的同側(cè)子宮角內(nèi)。據(jù)測(cè)定,其胚胎成活率為70.5%,明顯高于移植1枚的成活率(62%)。
胚胎質(zhì)量與移植方法
將胚齡為6天~6天半胚胎移入同步發(fā)情±12小時(shí)(9.74±2.85)的受體子宮角內(nèi),此時(shí)大多為早期囊胚或囊胚,其受胎率及產(chǎn)羔率也較高,桑椹胚受胎率52.6%(81/51),產(chǎn)羔率85.6%(101/118);早期囊胚受胎率59.4%(19/32);產(chǎn)羔率88.5%(23/26);擴(kuò)張囊胚的受胎率66.2%(43/65),產(chǎn)羔率78.3%(65/83);囊胚受胎率57.7%(45/78),產(chǎn)羔率98.5%(58/59);孵化胚受胎率52.2%(24/26),產(chǎn)羔率81.8%(27/33)。由此可見,胚胎質(zhì)量的好壞,對(duì)受胎率影響很大。采用腹腔鏡進(jìn)行移植,其特點(diǎn)是創(chuàng)口小,移植速度快,術(shù)后感染率低,一般手術(shù)熟練者移植1只需1分半鐘~3分鐘,每天可移植120只~150只,鮮胚妊娠率為60%~80%,術(shù)后感染率為5%以下,可以有效地節(jié)約時(shí)間,提高受胎率。
飼養(yǎng)管理與妊娠診斷
由于移植后的受體羊身價(jià)倍增,應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,給予營(yíng)養(yǎng)豐富的飼草飼料,避免因驚嚇、急趕、突然改變飼養(yǎng)環(huán)境、喂冰凍飼料及飲水等引起的應(yīng)激反應(yīng)造成胚胎早期死亡和胚移羊中后期流產(chǎn),應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理;利用B超儀器進(jìn)行早期診斷,對(duì)懷孕胚胎移植羊按移植時(shí)間、批次以35只為單位組群,安排責(zé)任心強(qiáng)的人員管護(hù)飼養(yǎng),每天檢查1次~2次傷口,發(fā)現(xiàn)傷口感染盡早處理。移植后兩個(gè)情期再進(jìn)行妊娠診斷:一般以2個(gè)情期未返情或用試情羊放入測(cè)情進(jìn)行鑒定,借助超聲波掃描儀進(jìn)行確診,及時(shí)處理空懷羊,給懷孕羊補(bǔ)充胡蘿卜等富含維生素A、D、E的飼草飼料,飼喂全價(jià)飼料,補(bǔ)充鈣、磷、鐵、硒等礦物質(zhì)微量元素。
綜上所述,胚胎移植技術(shù)環(huán)節(jié)多,程序復(fù)雜,關(guān)鍵技術(shù)要求嚴(yán)格,抓好每個(gè)環(huán)節(jié)都很重要,要想取得良好的移植效果,應(yīng)具備技術(shù)過硬的專業(yè)隊(duì)伍和責(zé)任心強(qiáng)的管理人員,才能使胚胎移植成功率達(dá)到更高的水平。