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分辨熒光分析法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
  時間分辨熒光分析法(Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA)是近十年發(fā)展起來的一測微量分析方法,是目前最靈敏的微量分析技術,其靈敏度高達10-19,較放射免疫分析(RIA)高出3個數(shù)量級。
  時間分辨熒光分析法(TRFIA)實際上是在熒光分析(FIA)的基礎上發(fā)展起來的,它是一種特殊的熒光分析。熒光分析的利用了熒光的波長與其激發(fā)波長的巨大差異克服了普通紫外-可見分光分析法中雜色光的影響,同時,熒光分析與普通分光不同,光電接受器與激發(fā)光不在同一直線上,激發(fā)光不能直接到達光電接受器,從而大幅度的提高了光學分析的靈敏度。但是,當進行超微量分析的時候,激發(fā)光的雜散光的影響就顯得嚴重了。因此,解決激發(fā)光的雜散光的影響成了提高靈敏度的瓶頸。
  解決雜散光影響的最好方法當然是測量時沒有激發(fā)光的存在。但普通的熒光標志物熒光壽命非常短,激發(fā)光消失,熒光也消失。不過有非常少的稀土金屬(Eu、Tb、Sm、Dy)的熒光壽命較長,可達1-2ms,能夠滿足測量要求,因此而產(chǎn)生了時間分辨熒光分析法,即使用長效熒光標記物,在關閉激發(fā)光后再測定熒光強度的分析方法。
  平時常用的稀土金屬主要是Eu(銪)和Tb(鋱),Eu熒光壽命1ms,在水中不穩(wěn)定,但加入增強劑后可以克服;Tb熒光壽命1.6ms,水中穩(wěn)定,但其熒光波長短、散射嚴重、能量大易使組分分解,因此從測量方法學上看Tb很好,但不適合用于生物分析,故Eu最為常用。
  由于常用Eu作為熒光標記,因此增強劑就成了試劑中的重要組成。增強劑原理:利用含絡合劑、表面活性劑的溶液的親水和親脂性同時存在,使Eu在水中處于穩(wěn)定狀態(tài),F(xiàn)在有些試劑,在絡合Eu在抗體上時已考慮了增強問題,而使用了具有增強作用的新絡合劑,因而有的試劑沒有單獨的增強劑。
  隨著檢驗醫(yī)學的發(fā)展,對微量、超微量的測定會越來越多,同時RIA的污染問題會越來越被重視,因此,時間分辨熒光分析法(TRFIA)具有越來越大的應用空間。
 
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