一、原理
人的羊水細(xì)胞能長(zhǎng)成單層并可連續(xù)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，但它們的一些特征與一般成纖維細(xì)胞不同。在羊水中存在著各種不同類型的胎兒細(xì)胞，依據(jù)其外形和生長(zhǎng)特征可區(qū)分為以下三類：上皮細(xì)胞（E）、成纖維細(xì)胞（F）和羊水細(xì)胞（AF）。E細(xì)胞在胰酶消化的連續(xù)培養(yǎng)中不再生長(zhǎng)，所以在培養(yǎng)過(guò)程中的生長(zhǎng)期最短。AF細(xì)胞在再培養(yǎng)中一開(kāi)始就長(zhǎng)得很好，染色體分析大多用這類細(xì)胞。F細(xì)胞在再培養(yǎng)中潛在的生長(zhǎng)期最長(zhǎng)，在較老的羊水培養(yǎng)物中占優(yōu)勢(shì)。通常在培養(yǎng)后3—4天（可能更早些）即出現(xiàn)E細(xì)胞的集落，它們不適合再培養(yǎng)作染色體分析。大約在第7天出現(xiàn)的AF細(xì)胞可被用于染色體制備。如果在培養(yǎng)后第10天還未見(jiàn)長(zhǎng)出新的細(xì)胞，就應(yīng)考慮第二次羊膜穿刺。
二、用品和試劑
滅菌刻度離心管，0.25%胰蛋白酶，生長(zhǎng)培養(yǎng)基（成分：RPMI-1640 80%，滅活小牛血清20%），其余同外周血染色體制備。
三、操作步驟
1．10—20ml無(wú)菌羊水，1000—1500rpm離心10分鐘，吸去上清，保留1ml羊水和沉降的細(xì)胞。
2．用吸管使之懸浮，并吸至25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，每瓶含約0.3—0.5ml細(xì)胞懸液，再向其加入3ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
3．搖勻后37℃靜止培養(yǎng)5—7天（不要挪動(dòng)，以免影響細(xì)胞貼壁）。
4．倒置顯微鏡觀察，可見(jiàn)部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)并形成細(xì)胞小島，此時(shí)可以換液。
5．常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)至第9—11天即可收獲細(xì)胞。
6．終止培養(yǎng)前4小時(shí)加秋水仙堿，使終濃度為0.1微克/毫升。
7．培養(yǎng)結(jié)束用1ml胰蛋白酶液消化5分鐘，終止消化，并轉(zhuǎn)移至10ml離心管中，1000rpm離心10分鐘，收集細(xì)胞。
8．常規(guī)制備染色體，步驟同外周血染色體制備。
人的羊水細(xì)胞能長(zhǎng)成單層并可連續(xù)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，但它們的一些特征與一般成纖維細(xì)胞不同。在羊水中存在著各種不同類型的胎兒細(xì)胞，依據(jù)其外形和生長(zhǎng)特征可區(qū)分為以下三類：上皮細(xì)胞（E）、成纖維細(xì)胞（F）和羊水細(xì)胞（AF）。E細(xì)胞在胰酶消化的連續(xù)培養(yǎng)中不再生長(zhǎng)，所以在培養(yǎng)過(guò)程中的生長(zhǎng)期最短。AF細(xì)胞在再培養(yǎng)中一開(kāi)始就長(zhǎng)得很好，染色體分析大多用這類細(xì)胞。F細(xì)胞在再培養(yǎng)中潛在的生長(zhǎng)期最長(zhǎng)，在較老的羊水培養(yǎng)物中占優(yōu)勢(shì)。通常在培養(yǎng)后3—4天（可能更早些）即出現(xiàn)E細(xì)胞的集落，它們不適合再培養(yǎng)作染色體分析。大約在第7天出現(xiàn)的AF細(xì)胞可被用于染色體制備。如果在培養(yǎng)后第10天還未見(jiàn)長(zhǎng)出新的細(xì)胞，就應(yīng)考慮第二次羊膜穿刺。
二、用品和試劑
滅菌刻度離心管，0.25%胰蛋白酶，生長(zhǎng)培養(yǎng)基（成分：RPMI-1640 80%，滅活小牛血清20%），其余同外周血染色體制備。
三、操作步驟
1．10—20ml無(wú)菌羊水，1000—1500rpm離心10分鐘，吸去上清，保留1ml羊水和沉降的細(xì)胞。
2．用吸管使之懸浮，并吸至25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，每瓶含約0.3—0.5ml細(xì)胞懸液，再向其加入3ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
3．搖勻后37℃靜止培養(yǎng)5—7天（不要挪動(dòng)，以免影響細(xì)胞貼壁）。
4．倒置顯微鏡觀察，可見(jiàn)部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)并形成細(xì)胞小島，此時(shí)可以換液。
5．常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)至第9—11天即可收獲細(xì)胞。
6．終止培養(yǎng)前4小時(shí)加秋水仙堿，使終濃度為0.1微克/毫升。
7．培養(yǎng)結(jié)束用1ml胰蛋白酶液消化5分鐘，終止消化，并轉(zhuǎn)移至10ml離心管中，1000rpm離心10分鐘，收集細(xì)胞。
8．常規(guī)制備染色體，步驟同外周血染色體制備。