一、 血液的采集
常用的采血方法有割(剪)尾采血、眼眶靜脈叢采血、斷頭采血、心臟采血、頸靜脈(動(dòng)脈)采血、股動(dòng)脈(靜脈)采血、耳靜脈采血、前肢頭靜脈才學(xué)、后肢小靜脈采血等。
二、 尿液的采集
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尿液常用代謝籠采集,也可通過其他裝置來采集。
(一)、用代謝籠采集尿液
代謝籠用于收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自然排出的尿液,是一種特別設(shè)計(jì)的為采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種排泄物的密封式飼養(yǎng)籠,有的代謝籠除可收集尿液外,又可收集糞便和動(dòng)物呼出的CO2。一般簡(jiǎn)單的代謝籠主要用來收集尿液。防在代謝籠內(nèi)飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,可通過其特殊裝置收集尿液。
(二)、導(dǎo)尿法收集尿液
施行導(dǎo)尿術(shù),較適宜于犬、猴等大動(dòng)物。一般不需要麻醉,導(dǎo)尿時(shí)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仰臥固定,用甘油潤滑導(dǎo)尿管。對(duì)雄性動(dòng)物,操作員用一只手握住陰莖,另一只手將陰莖包皮向下,暴露龜頭,使尿道口張開,將導(dǎo)尿管緩慢插入,導(dǎo)尿管推進(jìn)到尿道膜部時(shí)有抵抗感,此時(shí)注意動(dòng)作輕柔,繼續(xù)向膀胱推進(jìn)導(dǎo)尿管,即有尿液流出。雌性動(dòng)物尿道外口在陰道前庭,導(dǎo)尿時(shí)于陰道前庭腹側(cè)將導(dǎo)尿管插入陰道外口,其后操作同雄性動(dòng)物導(dǎo)尿術(shù)。
用導(dǎo)尿法導(dǎo)尿可采集到?jīng)]有污染的尿液。如果嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作,可收集到無菌尿液。
(三)輸尿管插管采集尿液
一般用于要求精確計(jì)量單位時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排尿量的實(shí)驗(yàn)。剖腹后,將膀胱牽拉至腹腔外,暴露膀胱底兩側(cè)的輸尿管。在兩側(cè)輸尿管近膀胱處用線分別結(jié)扎,于輸尿管結(jié)扎處上方剪一小口,向腎臟方向分別插入充滿生理鹽水的插管,用線結(jié)扎固定插管,即可見尿液從插管滴出,可以收集。采尿過程中要用38℃熱生理鹽水紗布遮蓋切口及膀胱。
(四)壓迫膀胱采集尿液
實(shí)驗(yàn)人員用手在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下腹部加壓,手法既輕柔又有力。當(dāng)增加的壓力使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膀胱括約肌松弛時(shí),尿液會(huì)自動(dòng)流出,即行收集。
(五)穿刺膀胱采集尿液
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉固定后,剪去下腹部恥骨聯(lián)合之上,腹正中線兩側(cè)的被毛,消毒后用注射針頭接注射器穿刺。取鈍角進(jìn)針,針頭穿過皮膚后稍微改變角度,以避免穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,邊緩慢進(jìn)針邊回抽,直到抽到尿液為止。
(六)剖腹采集尿液
按上述穿刺膀胱采集尿液法做術(shù)前準(zhǔn)備,其皮膚準(zhǔn)備范圍應(yīng)更大。剖腹暴露膀胱,直視下穿刺膀胱抽取尿液。也可于穿刺前用無齒鑷夾住部分膀胱壁,從鑷子下方的膀胱壁進(jìn)針抽尿。
(七)提鼠采集尿液
鼠類被人抓住尾巴提起即出現(xiàn)排尿反射,以小鼠的這種反射最明顯?梢岳眠@一反射收集尿液。當(dāng)鼠類被提起尾巴排尿后,尿滴掛在尿道外口附近的被毛上,不會(huì)馬上流走,操作人員應(yīng)迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。
三、 胸水和腹水的采集
(一)胸水的采集
主要采用胸腔穿刺法收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胸水,也可處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖開胸腔采集胸水。
1. 穿刺點(diǎn)定位
于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腋后線第11~12肋間隙穿刺,穿刺針緊貼肋骨上緣,否則容易損傷肋間神經(jīng)。也可在胸壁近胸骨左側(cè)緣第4~5肋間隙穿刺。
2. 穿刺方法
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取立位或半臥位固定,局部皮膚去毛、消毒、麻醉,穿刺針頭與注射器之間接三通連接裝置,實(shí)驗(yàn)人員以左手拇指、食指繃緊局部皮膚,右手握穿刺針緊靠肋骨下緣處垂直進(jìn)針,穿刺肋間肌時(shí)產(chǎn)生一定阻力,當(dāng)阻力消失有落空感時(shí),說明已刺入胸膜腔,用左手固定穿刺針,打開三通連接裝置,緩慢抽取胸水。
(二)腹水的采集
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被固定于站立位。局部皮膚去毛、消毒、麻醉。用無菌止血鉗小心提起皮膚,右手持小針頭或穿刺套管針沿下腹部靠腹壁正中線處輕輕垂直刺入,注意不可刺入太深,以免損傷內(nèi)臟,針頭有落空感后,說明穿刺針已
四、 分泌液的采集
(一)陰道分泌物的采集
適于觀察陰道角質(zhì)化上皮細(xì)胞。
1. 滴管沖洗法
用消毒滴管吸取少量生理鹽水仔細(xì)、反復(fù)沖洗被檢雌性動(dòng)物陰道,將沖洗液吸出滴在載波片上晾干后染色鏡檢。也可直接將沖洗液置于低倍顯微鏡下觀察,根據(jù)細(xì)胞類型變化鑒別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)情周期中的不同時(shí)期。
2. 檫拭法
用生理鹽水將消毒棉拭子濕潤后,擠干棉拭子上的生理鹽水,輕輕插入雌性動(dòng)物陰道內(nèi),沿陰道內(nèi)壁檫拭、轉(zhuǎn)動(dòng),然后取出并作陰道涂片,進(jìn)行鏡檢。
(二)精液的采集
1. 人工陰道套采精液法
本法適用于犬、豬、羊等大動(dòng)物,采用特制的人工陰道套套在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物陰莖上采集精液。采精時(shí),一手捏住陰道套,套住雄性動(dòng)物的陰莖,以完全套住雄性動(dòng)物的陰莖為佳,插入陰道套后,若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)出低叫聲,表明已經(jīng)射精。此時(shí)可取下陰道套,拆下采精瓶,取出精液,迅速做有關(guān)檢查。
2.陰道栓采精法
本法是將陰道栓涂片染色,鏡檢凝固的精液。陰道栓是雄性大、小鼠的精液和雌性陰道分泌物混合,在雌鼠陰道內(nèi)凝結(jié)而成白色稍透明、圓錐形的栓狀物,一般交配后2~4小時(shí)即可在雌鼠陰道口形成,并可在陰道停留12~24小時(shí)。
3.其他采精液法
用電流等物理方法刺激雄性動(dòng)物的陰莖或其他性敏感區(qū),使雄性動(dòng)物被刺激發(fā)情,直至射精,用采精瓶采集射出的精液。
(三)乳汁的采集
用按摩擠奶收集乳汁的方法適合犬、豬、羊等大動(dòng)物乳汁的采集。選用哺乳期的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在早上采集乳汁量最多,用手指輕輕按摩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物乳頭,使乳汁自然流出,如乳汁不能自然流出,可張開手掌從乳房基底部朝乳頭方向按摩、擠呀整個(gè)乳房,即可擠出乳汁。
五、 骨髓的采集
采集骨髓一般選擇胸骨、肋骨、髁骨、脛骨和股骨等造血功能活躍的骨組織。猴、犬、羊等大動(dòng)物骨髓的采集用活體穿刺取骨髓的方法;大、小鼠等小動(dòng)物骨頭小難穿刺,只能剖殺后采胸骨、股骨的骨髓。
(一)猴、犬、羊等的骨髓采集法
1. 骨髓穿刺點(diǎn)定位
(1)胸骨:穿刺部位在胸骨中線,胸骨體與胸骨柄連接處,或選胸骨上1/3部。
(2)脛骨:穿刺部位在脛骨內(nèi)側(cè),脛骨上端的下方1厘米處。
(3)肋骨:穿刺部位在第5~7肋骨各自的中點(diǎn)上。
(4)髁骨:穿刺部位在髁前上棘后2~3厘米的髁嵴。
(5)股骨:穿刺部位在股骨內(nèi)側(cè)面,靠下端的凹面處。
2. 骨髓穿刺方法
(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按要求固定,穿刺部位去毛、消毒、麻醉,要求局部麻醉范圍直達(dá)骨膜,也可作全麻。
(2)操作人員帶消毒手套,確定穿刺點(diǎn),估計(jì)從皮膚到骨髓的距離并依此固定骨髓穿刺針長度。左手拇、食指繃緊穿刺點(diǎn)周圍皮膚,右手持穿刺針在穿刺點(diǎn)垂直進(jìn)針,小弧度左右旋轉(zhuǎn)鉆入,當(dāng)有落空感時(shí)表示針尖已進(jìn)入骨髓腔。用左手固定穿刺針,右手抽出針芯,連接注射器緩慢抽吸骨髓組織,當(dāng)注射器內(nèi)抽到少許骨髓時(shí)立即停止抽吸,取出注射器將骨髓推注到載玻片上,迅速涂片數(shù)張,以備染色鏡檢。
(3)左手壓住穿刺點(diǎn)周圍皮膚,迅速拔出穿刺針,用棉球壓迫數(shù)分鐘。如穿刺的是肋骨,除壓迫止血外,還需膠布封貼穿刺點(diǎn),防止發(fā)生氣胸。
(二)大鼠、小鼠的骨髓采集法
將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖殺、固定,解剖取出股骨或胸骨,于第三胸骨節(jié)處剪斷,將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的試管內(nèi)或玻片上,繼而涂片、染色、鏡檢。