采血方法的選擇,決定于實驗的目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、血紅蛋白的測定,血液涂片以及酶活性微量分析法等,可刺破組織取毛細血管的血。當需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時,若需反復(fù)多次,應(yīng)自遠離心臟端開始,以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如,研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂,需要比較動、動脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及 K 、Na 、CI-離子濃度,必須采取動脈血液。 采血時要注意:⑴采血場所有充足的光線;室溫夏季最好保持在25-28℃,冬季,15-20℃為宜;⑵采血用具有采用部位一般需要進行消毒;⑶采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥;⑷若需抗凝全血,在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑.
1.取少量血
a.尾靜脈 大鼠、小鼠
b.耳靜脈 兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊
c.眼底靜脈叢 兔、大鼠、小鼠
d.舌下靜脈 兔
e.腹壁靜脈 青蛙、蟾蜍
f.冠、腳蹼皮下靜脈 雞、鴨、鵝
2.取中量血
a.后肢外側(cè)皮下小隱靜脈 狗、猴、貓
b.前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈 狗、猴、貓
c.耳中央動脈 兔
d.頸靜脈 狗、貓、兔
e.心臟 豚鼠、大鼠、小鼠
f.斷頭 大鼠、小鼠
g.翼下靜脈 雞、鴨、鴿、鵝
h.頸動脈 雞、鴨、鴿、鵝
3.取大量血
a.股動脈、頸動脈 狗、猴、貓、兔
b.心臟 狗、猴、貓、兔
c.頸靜脈 馬、牛、山羊、綿羊
d.摘眼球 大鼠、小鼠
采動物品種 最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml)
小 鼠 0.2 0.3
大 鼠 1 2
豚 鼠 5 10
兔 10 40
狼 狗 100 500
獵 狗 50 200
猴 15 60
1.割(剪)尾采血 當所需血量很少時采用本法。固定動物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒,然后浸在45℃左右的溫水中數(shù)分鐘,使尾部血管充盈。再將尾擦干,用銳器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm,讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取,采血結(jié)束,傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口,割破尾動脈或靜脈,收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml,大鼠0.3~0.5ml。
2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多時(僅做白細胞計數(shù)或血紅蛋白檢查),可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭,再用酒精消毒和擦拭,使鼠尾充血。用7號或8號注射針頭,刺入鼠尾靜脈,拔出針頭時即有血滴出,一次可采集10~50mm3。如果長期反復(fù)取血,應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺,以后再逐漸向近心端穿刺。
3.眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部(大鼠采血需帶上紗手套),應(yīng)防止動物窒息。當取血時左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè),使眶后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號針頭的1ml注射器或長頸(3~4cm)硬質(zhì)玻璃滴管(毛細管內(nèi)徑0.5-1.0mm),使采血器與鼠面成45℃的夾角,由眼內(nèi)角刺入,針頭斜面先向眼球,刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對著眼眶后界。刺入濃度,小鼠約2~3mm,大鼠約4~5mm。當感到有阻力時即停止推進,同時,將針退出約0.1-0.5mm,邊退邊抽。若穿刺適當血液能自然流入毛細管中,當?shù)玫剿璧难亢,即除去加于頸部的壓力,同時,將采血器拔出,以防止術(shù)后穿刺孔出血。 若技術(shù)熟練,用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml;體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml,可適用于某些生物化學項目的檢驗。
4.斷頭取血 采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大(小)鼠的頸部皮膚,并作動物頭朝下傾的姿勢。右手用剪刀猛剪鼠頸,約1/2-4/5的頸部前剪斷,讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.8~1.2ml;大鼠約5-10ml。
5.心臟采血 鼠類的心臟較小,且心率較快,心臟采血比較困難,故少用;铙w采血方法與豚鼠相同。若做開胸一次死亡采血,先將動物作深麻醉,打開胸腔,暴露心臟,用針頭刺入右心室,吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml;大鼠約0.8-1.2ml。
6.頸動靜脈采血 先將動物仰位固定,切開頸部皮膚,分離皮下結(jié)締組織,使頸靜脈充分暴露,可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動脈,離心端結(jié)扎,向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。
7.腹主動脈采血 最好先將動物麻醉,仰臥固定在手術(shù)架上,從腹正中線皮膚切開腹腔,使腹主動脈清楚暴露。用注射器吸出血液,防止溶血。或用無齒鑷子剝離結(jié)締組織,夾住動脈近心端,用尖頭手術(shù)剪刀,剪斷動脈,使血液噴入盛器。
8.股動(靜)脈采血 先由助手握住動物,采血者左手拉直動物下肢,使靜脈充盈;蛘咭圆珓訛橹笜,右手用注射器刺入血管。體重15-20g 小鼠采血約0.2-0.8ml,大鼠約0.4-0.6ml。
豚鼠采血法
1.耳緣剪口采血 將耳消毒后,用銳器(刀或刀片)割破耳緣,在切口邊緣涂抹20%檸檬酸鈉溶液,阻止血凝,則血可自切口自動流出,進入盛器。操作時,使耳充血效果較好。此法能采血0.5ml左右。
2.心臟采血 取血前應(yīng)探明心臟搏動最強部位,通常在胸骨左緣的正中,選心跳最顯的部位作穿刺。針頭宜稍細長些,以免發(fā)生手術(shù)后穿刺孔出血,其操作手法詳見兔心臟采血。因豚鼠身體較小,一般可不必將動物固定在解剖臺上,而可由助手握住前后肢進行采血即可。成年豚鼠每周采血應(yīng)不超過10ml為宜。
3.肌動脈采血 將動脈仰位固定在手術(shù)臺上,剪去腹股溝區(qū)的毛,麻醉后,局部用碘酒消毒。切開長約2-3cm的皮膚,使股動脈暴露及分離。然后,用鑷子提起股動脈,遠端結(jié)扎,近端用止血鉗夾住,在動脈中央剪一小孔,用無菌玻璃小導(dǎo)管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入,放開止血鉗,血液即導(dǎo)管口流出。一次可采血10-20ml。
4.背中足靜脈取血 助手固定動物,將其右或左右膝關(guān)節(jié)伸直提到術(shù)者面前。術(shù)者將動物腳背面用酒精消毒,找出背中足靜脈后,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手拿的注射針刺入靜脈。拔針后立即出血,呈半球狀隆起。采血后,用紗布或脫脂棉壓迫止血。反復(fù)采血時,兩后肢交替使用。
兔采血法
1.耳靜脈采血 本法為最常用的取血法之一,常作多次反復(fù)取血用,因此,保護耳緣靜脈,防止發(fā)生栓塞特別重要。 將兔放入僅露出頭部及兩耳的固定盒中,或由助手以手扶住。選耳靜脈清晰的耳朵,將耳靜脈部位的毛拔去,用75%酒精局部消毒,待干。用手指輕輕摩擦兔耳,使靜脈擴張,用連有5(1/2)號針頭的注射器在耳緣靜脈末端刺破血管待血液漏出取血或?qū)⑨橆^逆血流方向刺入耳緣靜脈取血,取血完畢用棉球壓迫止血,此種采血法一次最多可采血5-10ml。
(2.耳中央動脈采血 將兔置于兔固定筒內(nèi),在兔耳的中央有一條較粗、顏色較鮮紅的中央動脈,用左手固定兔耳,右手取注射器,在中央動脈的末端,沿著動脈平行地向心方向刺入動脈,即可見動脈血進入針筒,取血完畢后注意止血。此法一次抽血可達15ml。但抽血時應(yīng)注意,由于兔耳中央動脈容易發(fā)生痙攣性收縮,因此抽血前,必須先讓兔耳充分充血,當動脈擴張,未發(fā)生痙攣性收縮之前立即進行抽血,如果等待時間過長,動脈經(jīng)常會發(fā)生較長時間的痙攣性收縮。取血用的針頭一般用6號針頭,不要太細。針刺部位從中央動脈末端開始。不要在近耳根部取血,因耳根部軟組織厚,血管位置略深,易刺透血管造成皮下出血。
3.心臟取血 將家兔仰臥固定,在第三肋間胸骨左緣3毫米處注射針垂直刺入心臟,血液隨即進入針管。注意事項有:⑴動作宜迅速,以縮短在心臟內(nèi)的留針時間和防止血液凝固;⑵如針頭已進入心臟但抽不出血時,應(yīng)將針頭稍微后退一點。⑶在胸腔內(nèi)針頭不應(yīng)左右擺動以防止傷及心,肺、一次可取血20-25ml。
4.后肢脛部皮下靜脈取血 將兔仰臥固定于兔固定板上,或由一人將兔固定好。拔去脛部被毛,在脛部上端股部扎以橡皮管,則在脛部外側(cè)淺表皮下,可清楚見到皮下靜脈。用左手兩指固定好靜脈,右手取帶有5(1/2)號針頭的注射器內(nèi)皮下靜脈平行方向刺入血管,抽一下針栓,如血進入注射器,表示針頭已刺入血管,即可取血。一次可取2~5ml。取完后必須用棉球壓迫取血部位止血,時間要略長些,因此處不易止血。如止血不妥,可造成皮下血腫,影響連續(xù)多次取血。
5.股靜脈、頸靜脈取血 先作股靜脈和頸靜脈暴露分離手術(shù)
⑴股靜脈取血 注射器平行于血管,從股靜脈下端向心方向刺入,徐徐抽動針栓即可取血。抽血完畢后要注意止血。股靜脈較易止血,用于紗布輕壓取血部位即可。若連續(xù)多次取血,取血部位宜盡量選擇靠離心端。
⑵外頸靜脈取血 注射器由近心端(距頸靜脈分支2-3厘米處)向頭側(cè)端順血管平等方向刺入,使注射針一直引深至頸靜脈分支叉處,即可取血。此處血管較粗,很容易取血,取血量也較多,一次可取10ml以上。取血完畢,拔出針頭,用干紗布輕輕壓迫取血部位也易止血。兔急性實驗的靜脈取血,用此法較方便。
狗、貓采血法
1.后肢外側(cè)小隱靜脈和前肢內(nèi)側(cè)下頭靜脈采血 此法最常用,且方便。后肢外側(cè)小隱靜脈在后肢脛部下1/3的外側(cè)淺表的皮下,由前側(cè)方向后行走。抽血前,將狗固定在狗架上或使狗側(cè)臥,由助手將狗固定好。將抽血部位的毛剪去,碘酒一酒精消毒皮膚。采血者左手拇指和食指握緊剪毛區(qū)上部,使下肢靜脈充盈,右手用連有6號或7號針頭的消毒器迅速穿刺入靜脈,左手放松將針固定,以適當速度抽血(以無氣泡為宜);?qū)⒛z皮帶綁在狗股部,或由助手握緊股部,即可,若僅需少量血液,可以不用注射器抽取,只需用針頭直接刺入靜脈,待血從針孔自然滴出,放入盛器或作涂片。 采集前肢內(nèi)側(cè)皮下的頭靜脈血時,操作方法基本與上述相同。一只狗一般采10-20ml血并不困難。
2.股動脈采血 本法為采取狗動脈血最常用的方法。操作也較簡便。稍加以訓(xùn)練的狗,在清醒狀態(tài)下將狗臥位固定于狗解剖臺上。伸展后肢向外伸直,暴露腹肥肉溝三角動脈搏動的部位,剪去毛。用碘酒消毒。左手中指、食指探摸股動脈跳動部位,并固定好血管,右手取連有5(1/2)號針頭的注射器,針頭由動脈跳動處直接刺入血管,若刺入動脈一般可見鮮紅血液流入注射器,有時還需微微轉(zhuǎn)動一下針頭或上下移動一下針頭,方見鮮血流入。有時,往往刺入靜脈,必須重抽之。待抽血完畢,迅速拔出針頭,用干藥棉壓迫止血2~3分鐘。
3.心臟采血 本法最好在麻醉下進行,馴服的狗不麻醉也行。將固定在手術(shù)臺上,前肢向背側(cè)方向固定,暴露胸部,將左側(cè)第3-5肋間的被毛剪去,用碘酒-酒精消毒皮膚。采血者用左手觸摸左側(cè)3-5肋間處,選擇心跳最顯處穿刺。一般選擇胸骨左緣外1cm第4肋間處。取連有6(1/2)號針頭的注射器,由上述部位進針,并向動物背側(cè)方向垂直刺入心臟。采血者可隨針接觸心跳的感覺,隨時調(diào)整刺入方向和濃度,擺動的角度盡量小,避免損傷心肌過重,或造成胸腔大出血。當針頭正確刺入心臟時,血即可進入抽射器,可抽取多量血液。
4.耳緣靜脈采血 本法宜取少量血液作血常規(guī)或微量酶活力檢查等。有訓(xùn)練的狗不必綁嘴,剪去耳尖部短毛,即可見耳緣靜脈,手法基本與兔相同。
5.頸靜脈 狗不需麻醉,經(jīng)訓(xùn)練的狗不需固定,未經(jīng)訓(xùn)練的狗應(yīng)予固定。取側(cè)臥位,剪去頸部被毛約10×3cm2范圍,用碘酒、酒精消毒皮膚。將狗頸部拉直,頭盡量后抑。用左手拇指壓住頸靜脈入胸部位的皮膚。使頸靜脈怒張,右手取連有6(1/2)號針頭的注射器。針頭沿血管平行方向向心端刺往前血管。由于此靜脈在皮下易滑動,針刺時除用左手固定好血管外,刺入要準確。取血后注意壓迫止血。采用此法一次可取較多量的血。 貓的采血法基本與狗相同。常采用前肢皮下頭靜脈、后肢的股靜脈、耳緣靜脈取血。需大量血液時可從頸靜脈取血。方法見前述。
猴采血法
與人類的采血法相似,常用者有以下幾種:
1.毛細血管采血 需血量少時,可在猴拇指或足跟等處采血。采血方法與人的手指或耳垂處的采血法相同。
2.靜脈采血 最宜部位是后肢皮下靜脈及外頸靜脈。后肢皮下靜脈的取血法與狗相似。 用外頸靜脈采血時,把猴固定在猴臺上,側(cè)臥,頭部略低于臺面,助手固定猴的頭部與肩部。先剪去頸部的毛,用碘酒-酒精消毒,即可見位于上頜角與鎖骨中點之間的怒張的外頸靜脈。用左手拇指按住靜脈,右手持連6(1/2)號針頭的注射器,其它操作與人的靜脈取血同。 也可在肘窩、腕骨、手背及足背選靜脈采血。但這些靜脈更細、易滑動、穿刺難,血流出速度慢。
3.動脈采血 股動脈可觸及。取血量多時常被優(yōu)先選用,手法與狗股動脈采血相似。此外,肱動脈與橈動脈也可用。
小鼠采血的幾個問題:
1。最大安全采血量:小鼠循環(huán)血量占體重的6%,或50-70mi/kg
采血占全血量的10%不會對機體造成嚴重的不良影響。3-4周后可以重新采集一次。
特別注意的是:老年小鼠血量降低。疾病會加重不良反應(yīng),所以必須考慮這些影響因素。
采血后應(yīng)補充響應(yīng)體積的液體
如果需要很短時間反復(fù)采血,比如每天一次,每次的采血量不應(yīng)超過全血的1%。
30g*6%=血量1.8mls
1.8mls*10%=0.18mls(最大安全采血量)
2。隱靜脈采血法
隱靜脈采血法是小量、反復(fù)小鼠采血的常用方法。特點是不用麻醉
3。頸靜脈采血法
隱靜脈采血法也是小量、反復(fù)小鼠采血的常用方法。特點是需要麻醉
4。心臟穿刺采血法。
麻醉動物
將動物仰放
局部酒精消毒
用塑料注射器,從動物的左側(cè)胸部,肋沿下,心尖部向右側(cè)15-30度角刺入心臟,給小負壓,小心操作