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化學(xué)切割錯配法(chemical cleavage of mismatch,CCM)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
CCM為在Maxam-Gilbert測序法的基礎(chǔ)上發(fā)展的一項檢測突變的技術(shù),其檢測突變的準(zhǔn)確性可與DNA測序相仿。其基本原理為將待測含DNA片段與相應(yīng)的野生型DNA片段或DNA和RNA片段混俁變性雜交,在異源雜合的雙鏈核酸分子中,錯配的C能被羥胺或哌啶切割,錯配的T能被四氧化餓切割,經(jīng)變性凝膠電泳即可確定是否存在突變。該法檢出率很高,也是檢片段最長的方法,已有報功檢測了1.7kb片段,如果同時對正、反義鏈進(jìn)行分析,檢出率可達(dá)100%。應(yīng)用熒光檢測系統(tǒng)可增強敏感度,可檢測到10個細(xì)胞中的1個突變細(xì)胞。該法中的化學(xué)試劑有毒,又發(fā)展了碳二亞胺檢測法(catodiimide,CDI),CDI為無毒物質(zhì),也可檢測大片段DNA的點突變。
 
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