一、概要
己烯雌酚(diethylstibestrol,DES)是一種人工合成的雌激素,在促進(jìn)動(dòng)物蛋白質(zhì)的合成代謝、提高動(dòng)物日增重和減少脂肪等方面效果明顯,因此一直被作為一種動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑用于畜禽以及水產(chǎn)品養(yǎng)殖中。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)研究發(fā)現(xiàn),DES是一種致癌物質(zhì),能夠在動(dòng)物源性食品如肝 臟、肌肉、蛋、奶中殘留,并通過(guò)食物鏈危害人體健康。因此世界各國(guó)規(guī)定食品動(dòng)物養(yǎng)殖中不得以任何途徑和方式使用DES養(yǎng)殖動(dòng)物及動(dòng)物性食品中不得檢出 DES。     
己烯雌酚檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測(cè)產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

二、試驗(yàn)原理
 本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被己烯雌酚抗原，樣品殘留的己烯雌酚和微孔條上預(yù)包被的抗原共同競(jìng)爭(zhēng)抗己烯雌酚抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物己烯雌酚呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中己烯雌酚的含量。

三、適用范圍
可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織、飼料、尿液等樣品中己烯雌酚的殘留量。

四、交叉反應(yīng)率
己烯雌酚 ………………………………………  100%

五、檢測(cè)步驟
測(cè)定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
4、在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號(hào)：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。
5  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品100l/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中，然后加入己烯雌酚抗試劑50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250l/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。
7、加酶標(biāo)物：加入己烯雌酚酶標(biāo)物100l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復(fù)洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
9、測(cè)定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。(若無(wú)酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。

六、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣品最低檢測(cè)限：
動(dòng)物組織…………………………………1.5ppb
飼料、豆粕…………………………………10ppb
牛奶…………………………………3ppb
奶粉 …………………………………4ppb
回收率：
組織樣品………………………………………100±10%
飼料、豆粕…………………………………90±10%
牛奶………………………………………90±10%
奶粉………………………………………90±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒(méi)有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、儲(chǔ)存條件保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。