一、概要
 孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、嚴(yán)基塊綠、孔雀綠，其既是殺真菌劑，又是染料，易溶于水，溶液呈藍(lán)綠色。長(zhǎng)期以來(lái)，漁民都用它來(lái)預(yù)防魚(yú)的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲(chóng)病等，而且為了使鱗受損的魚(yú)延長(zhǎng)生命，在運(yùn)輸過(guò)程中和存放池內(nèi)，也常使用孔雀石綠。
 孔雀石綠檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測(cè)產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

二、試驗(yàn)原理
 孔雀石綠檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被孔雀石綠抗原，樣品殘留的孔雀石綠和微孔條上預(yù)包被的抗原共同競(jìng)爭(zhēng)抗孔雀石綠抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物孔雀石綠呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中孔雀石綠的含量。

三、適用范圍
 孔雀石綠檢測(cè)試劑盒可定性、定量檢測(cè)魚(yú)池或者魚(yú)缸水樣中的孔雀石綠殘留。

四、交叉反應(yīng)率
顯性孔雀石綠 ……………………………………………100%
結(jié)晶紫 ……………………………………………………180%

五、檢測(cè)步驟
測(cè)定前應(yīng)須知：
 1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
 2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
 3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
 4、在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線(xiàn)照射，用蓋板膜封住微孔板。
 操作步驟：
 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
 2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
 4、編號(hào)：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。
 5  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50μl/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中，然后加入抗試劑50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
 6、洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250μl/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。
 7、加酶標(biāo)物：加入酶標(biāo)物100μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復(fù)洗板步驟6。
 8、顯色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
 9、測(cè)定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。（若無(wú)酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定）。

六、孔雀石綠檢測(cè)試劑盒靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣品最低檢測(cè)限：
水樣………………………………………………………0.2ppb
回收率：
水樣……………………………………………………100±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項(xiàng)
 1、整個(gè)樣品處理過(guò)程要迅速，不應(yīng)放置過(guò)長(zhǎng)，以防影響檢測(cè)結(jié)果。
 2、室溫低于20℃或試劑及樣品沒(méi)有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
 3、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
 4、每加一種試劑前需將其搖勻。
 5、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
 6、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
 7、儲(chǔ)存條保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
 8、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
 9、濃縮洗滌液內(nèi)部如有結(jié)晶屬正�，F(xiàn)象，請(qǐng)加熱溶解后使用。
 10、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。
 11、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。